Få mere at vide
Beskrivelse
Det isolerede DNA er klar til nedstrømsanalyse ved metoder såsom PCR- eller qPCR-baserede assays eller massiv parallel DNA-sekventering. Chromatin immunopræcipitation (ChIP) er en kraftfuld teknik til at studere associeringen af visse proteiner med specifikke regioner af genomet. Disse sekvensspecifikke DNA-bindende proteiner menes at spille en rolle i sådanne cellulære processer som DNA-replikation, rekombination, reparation og segregering; kromosomal stabilitet; cellecyklusprogression; og epigenetisk tavshed. I et standard ChIP-assay fikseres en celle via formaldehydbehandling, og kromatinet forskydes og immunpræcipiteres via et meget specifikt antistof. Forskeren analyserer derefter DNA'et for at identificere de genomiske områder, hvor de kromatin-associerede proteiner binder til kromatinet in vivo. Ved brug af MAGnify system, celler eller væv behandles med formaldehyd for at generere protein-protein- og protein-DNA-tværbindinger mellem molekyler i umiddelbar nærhed af kromatinkomplekset. Cellerne lyseres derefter, og kromatinen frigives fra kernerne og forskydes ved sonikering for at reducere den gennemsnitlige DNA-fragmentstørrelse til 200 til 500 bp til analyse ved kvantitativ realtids-PCR (qPCR) eller 100 til 300 bp til analyse ved massiv parallel DNA-sekventering. Du immunpræcipiterer og isolerer derefter det tværbundne protein af interesse ved hjælp af et specifikt ChIP-kvalificeret antistof konjugeret til Dynabeads™ Protein A/G. Formaldehydtværbindingen vendes ved varmebehandling, og DNA'et forbundet med dette protein renses. DNA'et er nu klar til downstream-analyser såsom slutpunkts-PCR eller kvantitativ PCR (qPCR), genom-dækkende analyser ved hjælp af promotor-tiling-arrays eller næste generations sekventering. I PCR/qPCR-analyse er primere designet til at spænde over den ønskede DNA-sekvens af interesse, og dataene viser, om det specifikke protein af interesse er forbundet in vivo med det pågældende DNA-område.
- Følsom: opnå resultater med lavere prøvemængder end påkrævet med traditionelle ChIP-arbejdsgange
- Hurtig : protokol kan fuldføres på en enkelt dag sammenlignet med 2 til 3 dage for traditionel ChIP-analyse
Tekniske data
Tekniske data
| Indhold og opbevaring | Module 1 (shipped on wet ice, store at 4°C): • 2 × 1 ml Glycine (1.25 M) • 250 μl Dynabeads™ Protein A/G (do not freeze) • 1.4 ml Reverse Crosslinking Buffer • 500 μl DNA Purification Magnetic Beads (do not freeze) • 1.4 ml DNA Purification Buffer • 200 μl Proteinase K (20 mg/ml) Module 2 (shipped on wet ice, store at 4°C): • 10 ml IP Buffer 1 • 7.5 ml IP Buffer 2 • 8 ml DNA Wash Buffer • 7.2 ml DNA Elution Buffer Module 3 (shipped on dry ice, store at -20°C): • 100 μl Protease Inhibitors (200X) • 15 μl Mouse IgG (1 μg/μl) • 15 μl Rabbit IgG (1 μg/μl) Module (shipped on dry ice, store at -20°C): • 8 ml Dilution Buffer • 3.6 ml Lysis Buffer |
| High-throughput kompatibilitet | High-throughput Compatible |
| Prøvetype | Cell Cultures, DNA (Genomic), Live Cells |
| Produktlinje | MAGnify |
| Mængde | 24 reactions kit |
| Til brug med (applikation) | Chromatin Immunoprecipitation |
| Type | Immunoprecipitation/Co-Immunoprecipitation Kit |
| Tilstrækkelig til | 24 Reactions |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.