Få mere at vide
Invitrogen™ MAGnify™ Chromatin immunpræcipitationssystem
Shop alle Applied Biosystems produkterBeskrivelse
Det isolerede DNA er klar til nedstrømsanalyse ved metoder såsom PCR- eller qPCR-baserede assays eller massiv parallel DNA-sekventering. Chromatin immunopræcipitation (ChIP) er en kraftfuld teknik til at studere associeringen af visse proteiner med specifikke regioner af genomet. Disse sekvensspecifikke DNA-bindende proteiner menes at spille en rolle i sådanne cellulære processer som DNA-replikation, rekombination, reparation og segregering; kromosomal stabilitet; cellecyklusprogression; og epigenetisk tavshed. I et standard ChIP-assay fikseres en celle via formaldehydbehandling, og kromatinet forskydes og immunpræcipiteres via et meget specifikt antistof. Forskeren analyserer derefter DNA'et for at identificere de genomiske områder, hvor de kromatin-associerede proteiner binder til kromatinet in vivo. Ved brug af MAGnify system, celler eller væv behandles med formaldehyd for at generere protein-protein- og protein-DNA-tværbindinger mellem molekyler i umiddelbar nærhed af kromatinkomplekset. Cellerne lyseres derefter, og kromatinen frigives fra kernerne og forskydes ved sonikering for at reducere den gennemsnitlige DNA-fragmentstørrelse til 200 til 500 bp til analyse ved kvantitativ realtids-PCR (qPCR) eller 100 til 300 bp til analyse ved massiv parallel DNA-sekventering. Du immunpræcipiterer og isolerer derefter det tværbundne protein af interesse ved hjælp af et specifikt ChIP-kvalificeret antistof konjugeret til Dynabeads™ Protein A/G. Formaldehydtværbindingen vendes ved varmebehandling, og DNA'et forbundet med dette protein renses. DNA'et er nu klar til downstream-analyser såsom slutpunkts-PCR eller kvantitativ PCR (qPCR), genom-dækkende analyser ved hjælp af promotor-tiling-arrays eller næste generations sekventering. I PCR/qPCR-analyse er primere designet til at spænde over den ønskede DNA-sekvens af interesse, og dataene viser, om det specifikke protein af interesse er forbundet in vivo med det pågældende DNA-område.
- Følsom: opnå resultater med lavere prøvemængder end påkrævet med traditionelle ChIP-arbejdsgange
- Hurtig : protokol kan fuldføres på en enkelt dag sammenlignet med 2 til 3 dage for traditionel ChIP-analyse
Tekniske data
Tekniske data
| Indhold og opbevaring | Module 1 (shipped on wet ice, store at 4°C): • 2 × 1 ml Glycine (1.25 M) • 250 μl Dynabeads™ Protein A/G (do not freeze) • 1.4 ml Reverse Crosslinking Buffer • 500 μl DNA Purification Magnetic Beads (do not freeze) • 1.4 ml DNA Purification Buffer • 200 μl Proteinase K (20 mg/ml) Module 2 (shipped on wet ice, store at 4°C): • 10 ml IP Buffer 1 • 7.5 ml IP Buffer 2 • 8 ml DNA Wash Buffer • 7.2 ml DNA Elution Buffer Module 3 (shipped on dry ice, store at -20°C): • 100 μl Protease Inhibitors (200X) • 15 μl Mouse IgG (1 μg/μl) • 15 μl Rabbit IgG (1 μg/μl) Module (shipped on dry ice, store at -20°C): • 8 ml Dilution Buffer • 3.6 ml Lysis Buffer |
| High-throughput kompatibilitet | High-throughput Compatible |
| Prøvetype | Cell Cultures, DNA (Genomic), Live Cells |
| Produktlinje | MAGnify™ |
| Mængde | 24 reactions kit |
| Til brug med (applikation) | Chromatin Immunoprecipitation |
| Type | Immunoprecipitation/Co-Immunoprecipitation Kit |
| Tilstrækkelig til | 24 Reactions |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.