Invitrogen™ LIVE/DEAD™ BacLight™ Bakteriel levedygtighedssæt

LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt bruger blandinger af vores SYTO™ 9 grøn-fluorescerende nukleinsyrefarvning og den rød-fluorescerende nukleinsyrefarve, propidiumiodid. Disse farvninger adskiller sig både i deres spektrale egenskaber og i deres evne til at trænge ind i sunde bakterieceller. Når den bruges alene, mærker SYTO 9-farven generelt alle bakterier i en population — dem med intakte membraner og dem med beskadigede membraner. I modsætning hertil trænger propidiumiodid kun ind i bakterier med beskadigede membraner, hvilket forårsager en reduktion i SYTO 9-farvningsfluorescensen, når begge farvestoffer er til stede.

LIVE/DEAD Bac Light Bakteriel levedygtighedssæt er blevet grundigt testet med en række forskellige organismer og under flere forhold. Sættene er ideelle til fluorescensmikroskopi, da de levende (grønt fluorescerende) og døde (røde fluorescerende) celler kan ses separat. De er også velegnede til kvantitativ analyse med et fluorometer, fluorescensmikropladelæser, flowcytometer eller anden instrumentering.

Traditionelle metoder til vurdering af bakteriel levedygtighed er afhængige af metaboliske egenskaber eller membranintegritet. På grund af forskelle i morfologi, cytologi og fysiologi blandt de mange bakterieslægter har det imidlertid været en udfordring at udvikle en universelt anvendelig direkte-tælle-levedygtighedsanalyse. LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt baseret på membranintegritet giver forskere mulighed for nemt, pålideligt og kvantitativt at skelne mellem levende og døde bakterier på få minutter, selv i en blandet population med forskellige bakterietyper.

LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt fås i tre forskellige formater:

LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt, til mikroskopi (Kat. Nr. L7007)
LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt til mikroskopi inkluderer to forskellige forblandede opløsninger af SYTO 9 og propidiumiodid (PI) i 300 μL af DMSO. De fluorescerende farvestoffer blandes i forskellige proportioner i hver enkelt: Komponent A – 1,67 mM SYTO 9& 1,67 mM PI, komponent B – 1,67 mM STYO 9 & 18,3 mM PI. Dette sæt er tilgængeligt for kunder, der allerede har udviklet protokoller ved hjælp af den færdigblandede farvestofformulering.

LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt, til mikroskopi & kvantitative analyser (Kat. nr. L7012)
LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt, til mikroskopi & kvantitative analyser inkluderer to separate opløsninger af SYTO 9 (3,34 mM) og propidiumiodid (20 mM) farvestoffer i 300 μl af DMSO. De separate farvningskomponenter muliggør fleksibilitet til optimering og letter kalibreringen af bakteriel fluorescens til kvantitative procedurer.

LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt (Kat. Nr. L13152)
For ekstra bekvemmelighed indeholder LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt 10 par af de formålte separate SYTO 9- og propidiumiodid-farvestoffer i forseglede polyethylen-overførselspipetter. Ud over den praktiske indpakning i de forseglede pipetter leveres de fluorescerende farvestoffer tørre, uden DMSO eller andre opløsningsmidler. Denne formulering kræver ikke nedkøling og forbliver stabil ved temperaturer ≤–20°C efter rekonstituering.

Alle tre sæt leveres med 10 ml BacLight monteringsolie til bakterier immobiliseret på membraner. Brydningsindekset ved 25°C er 1,517 ± 0,003.

Enhver fysiologisk buffer mellem pH 7,0–8,0, inklusive PBS, kan bruges til at fortynde SYTO-farvestofferne til farvningsopløsningen.

Ved de anbefalede reagensfortyndinger og -volumener indeholder kit L7007 og L7012 tilstrækkeligt materiale til at udføre ≥1000 individuelle tests i 96-brønds analyseplader, mange flere tests ved fluorescensmikroskopi eller ~200 tests ved flowcytometri.

I kit L13152 indeholder hvert applikatorpar tilstrækkeligt farvestof til at udføre 50 individuelle tests i en 96-brønds analyseplade, ~1000 analyser ved fluorescensmikroskopi eller 10 tests ved flowcytometri.

LIVE/DEAD BacLight bakteriel levedygtighedssæt er blevet testet på følgende bakteriearter: Bacillus cereus, B. subtilis, Clostridium perfringens, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Micrococcus luteus, Mycobacterium phlei, Pseudomonas aeruginosae, Pseudomonas aeruginosae, P, Mon. Serratia marcescens, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus og Streptococcus pyogenes. Alle disse bakterietyper har vist en god sammenhæng mellem resultaterne opnået med LIVE/DEAD BacLight Bakteriel levedygtighedssæt og dem opnået med standardpladetællinger.

Disse test blev udført på logaritmisk voksende kulturer af organismer. Derudover har vi modtaget positive rapporter fra forskere, der har brugt disse kits med: Agrobacterium tumefaciens, Edwardsiella ictaluri, Eurioplasma eurilytica, Lactobacillus sp., Mycoplasma hominus, Propionibacterium sp., Proteus mirabilis og Zymomonas sp.