Få mere at vide
Thermo Scientific™ LanthaScreen™ STAT5 TF-1 cellelinje
Beskrivelse
LanthaScreen™ GFP Cellular Assays muliggør analyse af post-translationelle modifikationer for en række målproteiner i en levende cellekontekst. I hæmatopoeitiske celler spiller JAK2/STAT5-signalvejen en væsentlig rolle i blodcelledannelse som reaktion på cytokiner såsom GM-CSF, IL-3 og EPO. På denne vej resulterer binding af disse cytokiner til deres respektive celleoverfladereceptorer i aktiveringen af JAK2, som igen phospho-aktiverer STAT5-proteiner ved specifikke tyrosinrester (Tyr-694/699).
LanthaScreen™ -STAT5 TF-1 er en human hæmatopoeitisk cellelinje, som konstitutivt udtrykker GFP-STAT5 fusionsproteiner. JAK2/STAT5-signalvejen er kendt for at være funktionelt intakt i denne cellelinje, derfor tjener GFP-STAT5-fusionsproteinet som et substrat for den inducerbare phosphorylering af JAK2. Ved hjælp af denne cellelinje er der udviklet et homogent immunassay, hvor phosphoryleringstilstanden af GFP-STAT5 påvises i cellelysater ved hjælp af en LanthaScreen™ Terbium-anti-mus og anti-phospho STAT5 [pTyr694/699] antistofpar, i en tidsopløst FRET (TR-FRET) udlæsning. GFP-STAT5 Lentivirus blev transduceret til TF-1-celler efterfulgt af selektion med Blasticidin.
Denne cellelinje er en klonal population isoleret ved flowcytometri under anvendelse af GFP-fluorescens som sorteringsmarkør og er blevet screenet for den konstitutive ekspression af GFP-STAT5-fusionsprotein. Ved hjælp af et lytisk TR-FRET-immunassay valideres denne cellelinje for EC50 og Z' under optimerede betingelser ved anvendelse af GM-CSF som en agonist til JAK2-medieret GFP-STAT5-phosphorylering. Dette assay er også blevet testet for assay-ydeevne under variable eksperimentelle betingelser, herunder celleudpladningstæthed, stimuleringstid, DMSO-tolerance og lysis/ækvilibreringstid.
Tekniske data
Tekniske data
| Alternative agonister | IL-3, EPO |
| Antagonister | JAK inhibitor |
| Assay Entry | Cellebaseret terbiumphospho-specifik aktivitet (stabil) |
| Celletilstand | Opdeling af celler |
| Indhold og opbevaring | LanthaScreen™ STAT5 TF-1-celler sendes på tøris. Opbevares i flydende nitrogen umiddelbart efter modtagelsen, eller optø til øjeblikkelig brug. |
| Oversigt | LanthaScreen™ STAT5 TF-1 Cell Line, 1Vial, Fluorescent Detection Method, Kinases, Signaling Pathway Druggable Target, LanthaScreen™ System, End Point Readout, Liquid nitrogen Storage |
| Detektionsmetode | Fluorescens |
| Til brug med (applikation) | Pharma and biopharma, drug discovery and development, target and lead identification and validation, kinase biology, kinase pathway analysis, pathway biology, cellular pathway analysis assays, cellSensor™ cellular pathway assays |
| Gen symbol | STAT5A |
| Optimal respons | GM-CSF (EC50 = 0,33 ng/ml) |
| Vis mere |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.