Få mere at vide
Thermo Scientific™ LanthaScreen™ STAT1 U2OS cellelinje
Beskrivelse
JAK/STAT1 signalvejen er kendt for at blive aktiveret af type I/II interferoner såsom interferon-gamma og interferon-alfa. På denne vej resulterer binding af disse cytokiner til deres respektive celleoverfladereceptorer i aktiveringen af JAK'er, som igen phosphoaktiverer STAT1-proteiner ved en specifik tyrosinrest (Y701). LanthaScreen™ STAT1 U2OS er en human cellelinje, der konstitutivt udtrykker et GFPSTAT1-fusionsprotein. JAK/STAT1-signalvejen er kendt for at være funktionelt intakt i denne cellelinje; derfor tjener GFP-STAT1-fusionsproteinet som et substrat for den IFN-gamma-inducerbare phosphorylering af JAK'er. Ved hjælp af denne cellelinje er der udviklet et homogent immunassay, hvor phosphoryleringstilstanden af GFP-STAT1 påvises i cellelysater under anvendelse af et terbium-mærket anti-pY701-STAT1 antistof i en tidsopløst FRET (TR-FRET) udlæsning. GFP-STAT1 DNA-ekspressionskonstruktionen blev transficeret ind i U2OS-celler under anvendelse af Lipofectamine™ LTX Reagens, efterfulgt af udvælgelse med blasticidin.
Denne cellelinje er en klonal population isoleret ved flowcytometri under anvendelse af GFP-fluorescens som en sorteringsmarkør. Ved hjælp af det lytiske TR-FRET-immunoassay valideres denne cellelinje for EC50- og Zfi-faktorer under optimerede betingelser ved anvendelse af IFN-gamma som en ligand til JAK-medieret GFP-STAT1-phosphorylering. Dette assay er også blevet testet for assay-ydeevne under variable eksperimentelle betingelser, herunder cellepladerdensitet, stimuleringstid, DMSO-tolerance og assay-udviklingstid. Yderligere information ved hjælp af alternative stimuli og alternative assayprotokoller er tilgængelig.
Tekniske data
Tekniske data
| Alternative agonister | IFN-gamma |
| Antagonister | IFN-alfa |
| Assay Entry | Cellebaseret terbiumphospho-specifik aktivitet (stabil) |
| Celletilstand | Opdeling af celler |
| Indhold og opbevaring | LanthaScreen™ STAT1 U2OS-celler sendes på tøris. Opbevares i flydende nitrogen umiddelbart efter modtagelsen, eller optø til øjeblikkelig brug. |
| Til brug med (applikation) | Kinases, Signaling Pathway |
| Gen symbol | STAT1 |
| Primær agonist | IFN-γ |
| Produktlinje | LanthaScreen |
| Mængde | 1 hætteglas |
| Vis mere |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.