Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit til sekventering, uden kompetente celler

Hvert sæt bruger pCR™4-TOPO TA-vektor med specialdesignede sekventeringsprimersteder, der returnerer mere insert-sekvens og mindre vektorsekvens fra hver reaktion, og er tilgængelig med en række kompetente celler eller ingen kompetente celler, afhængigt af dine behov og budget. Disse sæt inkluderer alt, hvad der er nødvendigt for at klone og udvælge rekombinante vektorer, der indeholder dit foretrukne PCR-fragment.

TOPO TA Cloning Sæt til sekvensering: oversigt
Vektor: pCR4-TOPO TA vektor: optimeret kloningsvektor for forbedrede
sekventeringsresultater Kloningsmetode: TOPO™ TA Kloning™ : Topoisomerase –I baseret, 5-minutters ligering af PCR-produkter med 3'A udhæng (Taq -amplificeret) til vektorens kompetente
celler: Forskellige muligheder: vælg mellem sæt med generelle, højeffektive, bakteriofag T1-resistente eller hurtigtvoksende kompetente celler, eller brug din egen
pCR4-TOPO TA-vektor : optimeret til sekventering
Vi har fjernet meget af det multiple kloningssted fra pCR4-TOPO TA-vektoren for at forkorte afstanden mellem sekventeringsprimersteder og insertstedet til så lidt som 33 bp. Dette betyder, at sekventeringsreaktioner giver mindre vektorsekvens og mere insertsekvens. pCR4-TOPO TA-vektoren har steder for 4 almindelige sekventeringsprimere: M13 forward, M13 reverse, T7 og T3 . Sættene inkluderer en alikvot af hver.
pCR4-TOPO TA klonselektion og -manipulation
pCR4-TOPO TA-vektoren indeholder både ampicillin- og kanamycinresistensmarkører og en LacZα -ccdB genfusion til positiv selektion og blå/hvid screening. Vektorens minimerede multiple kloningssted inkluderer stadig flankerende EcoRI-steder til forenklet udskæring af klonede PCR-produkter og et unikt Sse8387I-sted til generering af indlejrede deletioner før sekventering. T7 og T3 promotorer er også til stede til in vitro transkription.
Forenklet TOPO-baseret kloning
ved hjælp af TOPO kloningsteknologi, er der ikke behov for PCR-primere indeholdende specifikke sekvenser, post-PCR procedurer, vektorpræparation eller andre tidskrævende DNA-manipulationstrin. Bare tilføj din PCR-reaktion direkte til den medfølgende topoisomerase-ladede vektor, inkuber 5 minutter og transformer med de medfølgende E. coli- kompetente celler.
Effektiv kloning
Med op til 95 % af klonerne, der bærer den ønskede indsats, kan du screene færre kloner og spare tid og penge. pCR4-TOPO TA-vektoren, der bruges i dette sæt, leveres med 3'T udhæng til effektiv ligering afTaq -amplificerede PCR-produkter, som indeholder 3'A udhæng.
Standarden inden for kloning
Når det kommer til kloning, TOPO kloningsteknologi har været en pålidelig partner for tusindvis af videnskabsmænd i over ti år. Hurtig, nem at bruge og effektiv, TOPO kloning er blevet anvendt på mange forskellige vektorer til en bred vifte af anvendelser.
TOPO TA Cloning Sæt til sekvensering: sæt
muligheder Den TOPO TA Cloning Kit til sekvensering kan købes med en række kompetente celler, der giver forskellige fordele afhængigt af dine behov:

• Generel kloning: TOP10 (Kat. nr. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Højeffektiv kloning: TOP10 Electrocomp™ Celler (kat. nr. K4580-01, K4580-40)
• Generel kloning, bakteriofag T1-resistens: DH5α -T1R (Kat. nr. K4595-01, K4595-40)
• Hurtig vækst: Mach1™ -T1R Kemisk Kompetent E. Coli (Kat. Nr. K4530-20)
• Giv din egen: for fleksibilitet og for at spare penge (kat. nr. 450030)

En version af sættet, der indeholder en PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit (Kat. nr. K4575-02) til brug i isolering af rent, sekventeringsklar, rekombinant plasmid er også tilgængeligt.

• Resistent over for Ampicillin (AmpR) og Kanamycin (KanR)
• Få mere sekvens: giver mulighed for mere insert-sekvens og mindre vektorsekvens ved anvendelse af standard-sekventeringsprimere
• Hurtigt og nemt: gå fra PCR til kloner på kun tre trin og på så lidt som 5 minutter hands-on tid
• Effektiv: opnå op til 95% kloner med korrekt indsættelse
• Bevist: pålidelig ydeevne i over et årti med over 4.000 citater

Kloning, PCR Kloning