Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit til sekvensering, med pCR™4-TOPO™ Vektor, en Shot™ TOP10 Kemisk kompetent E. coli , og PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

De TOPO™ TA Cloning™ Sæt til sekvensering bruger pCR™4-TOPO™ TA-vektor med specialdesignede sekventeringsprimersteder, der returnerer mere insert-sekvens og mindre vektorsekvens fra hver reaktion. Disse kits inkluderer alt, hvad der er nødvendigt for at klone og udvælge rekombinante vektorer, der indeholder det valgte PCR-fragment.

• Få mere sekvens— Giver mulighed for mere insert-sekvens og mindre vektorsekvens ved brug af standard sekventeringsprimere
• Hurtigt og nemt— Gå fra PCR-til-kloner i kun 3 trin og på så lidt som 5 minutter hands-on tid
• Effektiv— Opnå op til 95 % kloner med korrekt insert
• Dokumenteret— pålidelig ydeevne i over et årti med over 4000 citater

TOPO™ TA Cloning™ Oversigt over sæt til sekvensering

• VEKTOR: pCR™4-TOPO™ TA Vector —Optimeret kloningsvektor for forbedrede sekventeringsresultater
• KLONINGSMETODE: TOPO™ TA Cloning— Topoisomerase I baseret 5 minutters ligering af PCR-produkter med ´3 A udhæng (Taq -amplificeret) til vektoren
• KOMPETENTE CELLER: Forskellige muligheder —Vælg mellem sæt med enten generelle, højeffektive, bakteriofag T1-resistente eller hurtigtvoksende kompetente celler

pCR™4-TOPO™ TA Vector—optimeret til sekventering
Meget af det multiple kloningssted fra pCR™4-TOPO™ TA-vektor er blevet fjernet for at forkorte afstanden mellem sekventeringsprimersteder og insertstedet til så lidt som 33bp. Dette betyder, at sekventeringsreaktioner giver mindre vektorsekvens og mere insertsekvens. De pCR™4-TOPO™ TA-vektor har steder for 4 almindelige sekventeringsprimere: M13 forward, M13 reverse, T7 og T3 . Sættene inkluderer en alikvot af hver.

pCR™4-TOPO™ TA klon udvælgelse og manipulation
pCR™4-TOPO™ TA-vektor indeholder både ampicillin- og kanamycinresistensmarkører og en LacZα -ccdB genfusion til positiv selektion og blå/hvid screening. Vektorens ’minimerede multiple kloningssted inkluderer stadig flankerende EcoRI-steder til forenklet udskæring af klonede PCR-produkter og et unikt Sse8387I-sted til generering af indlejrede deletioner før sekventering. T7 og T3 promotorer er også til stede til in vitro- transkription.

Forenklet TOPO™ -Baseret kloning ved hjælp af
TOPO™ kloningsteknologi, er der ikke behov for PCR-primere indeholdende specifikke sekvenser, post-PCR procedurer, vektorpræparation eller andre tidskrævende DNA-manipulationstrin. Bare tilføj din PCR-reaktion direkte til den medfølgende topoisomerase-ladede vektor, inkuber 5 minutter og transformer med de medfølgende E. coli- kompetente celler.

Effektiv kloning Med
op til 95 % af klonerne, der bærer den ønskede indsats, kan du screene færre kloner for at hjælpe dig med at spare tid og penge. De pCR™4-TOPO™ TA-vektor, der bruges i dette sæt, leveres med ´3 T-udhæng til effektiv ligering afTaq -amplificerede PCR-produkter med 3 ´A udhæng.

Standarden inden for kloning
Når det kommer til kloning, TOPO™ kloningsteknologi har været en pålidelig partner for tusindvis af videnskabsmænd i over ti år. Hurtig, nem at bruge og effektiv, TOPO™ kloning er blevet anvendt på mange forskellige vektorer til en bred vifte af anvendelser. De TOPO™ TA Cloning™ Kit til sekvensering kan købes med en række kompetente celler, der giver forskellige fordele afhængigt af dine behov.