Invitrogen™ SuperScript™ III Første-strengs syntese SuperMix

SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix er en optimeret formulering til førstestrengs cDNA-syntese fra oprenset poly(A) ⁺ eller totalt RNA. RNA-mål fra 100 bp til> 12 kb kan detekteres med dette system. Mængden af udgangsmateriale kan variere fra 0,1 pg til 5μ g total RNA.

Dette sæt inkluderer SuperScript III/RNaseOUT enzymblanding, 2X First-Strand reaktionsblanding og en annealing buffer. SuperScript III omvendt Transcriptase er en version af MMLV RT, der er blevet konstrueret til at reducere RNase H-aktivitet og give øget termisk stabilitet. Enzymet kan bruges til at syntetisere cDNA ved et temperaturområde på 45-55 –C, °hvilket giver øget specificitet, højere udbytter af cDNA og mere fuldlængde produkt end mange tidligere reverse transkriptaser.

Brug af SuperScript III første-strengsyntese SuperMix SuperScript
III RT hæmmes ikke signifikant af ribosomalt og transfer-RNA og kan bruges til at syntetisere cDNA fra totalt RNA. RNaseOUT Rekombinant RNase-hæmmer er inkluderet i enzymblandingen for at sikre mod nedbrydning af mål-RNA på grund af ribonuklease-kontamination. 2X First-Strand-reaktionsblandingen inkluderer 10 mM _MgCl2 og 1 mM af hver dNTP i en bufferformulering, der er blevet optimeret til førstestrengssyntese af cDNA. Annealing-bufferen anvendes i det indledende template-primer-annealingstrin. Separate rør af oligo(dT) ₂₀ og tilfældige hexamerer er også tilvejebragt. cDNA-syntese kan udføres under anvendelse af enten totalt RNA eller poly(A) ^+- selekteret RNA primet med oligo(dT), tilfældige primere eller en genspecifik primer.