Invitrogen™ SuperScript™ Første-strengs syntesesystem til RT-PCR

SuperScript First-Strand Synthesis System til RT-PCR er optimeret til syntese af første-strengs cDNA fra oprenset poly(A) ⁺ eller totalt RNA. Systemet kan bruges med så lidt som 1 ng eller så meget som 5μ g total RNA. Efter syntese kan cDNA'et amplificeres med specifikke primere ved PCR uden mellemliggende organiske ekstraktioner eller ethanolpræcipitationer. I forbindelse med PCR kan systemet bruges til at detektere tilstedeværelsen af sjældne meddelelser, til at kvantificere mængden af specifikt mRNA fra et lille antal celler eller til at klone specifikke cDNA'er uden at konstruere et helt cDNA-bibliotek. Systemet er fleksibelt og tillader brugen af ethvert PCR-enzym. Kombiner med AccuPrimeTaq DNA-polymerase eller platinTaq DNA-polymerase til PCR med højere specificitet eller med AccuPrime Pfx DNA-polymerase til high-fidelity kloningsapplikationer.

SuperScript II RT
Førstestrengs cDNA-syntesereaktionen katalyseres af SuperScript II Reverse Transcriptase (RT). Dette enzym er blevet konstrueret til at reducere RNase H-aktiviteten, der nedbryder mRNA under førstestrengsreaktionen, hvilket resulterer i større cDNA-syntese i fuld længde og højere udbytter af førstestrengs cDNA end opnået med RNase H+ RT'er. Fordi SuperScript II RT ikke inhiberes væsentligt af ribosomalt og transfer-RNA, kan det bruges effektivt til at syntetisere førstestrengs cDNA fra et totalt RNA-præparat. Enzymet udviser øget termisk stabilitet og kan anvendes ved temperaturer op til 50 °C.

Anvendelse af SuperScript First-Strand Synthesis System til RT-PCR
Dette system er blevet optimeret til at syntetisere førstestrengs cDNA fra varierende mængder af udgangsmateriale. SuperScript II RT-koncentrationen er blevet sænket og RNaseOUT Rekombinant RNase-hæmmer er blevet tilføjet til systemet som en del af denne optimeringsproces. Derudover er reaktionsbetingelserne blevet ændret for yderligere at øge systemets følsomhed. Ved hjælp af kittet syntetiserer du førstestrengs cDNA ved hjælp af enten totalt RNA eller poly(A) ⁺ udvalgt RNA primet med oligo(dT), tilfældige primere eller en genspecifik primer. Udfør derefter PCR i et separat rør ved hjælp af primere, der er specifikke for genet af interesse.