Få mere at vide
Invitrogen™ pSCREEN-iT™ / lac Z-DEST Gateway™ Vektorsæt
Beskrivelse
Brug pSCREEN-iT™ /lacZ-DEST Gateway™ Vector Kit til at vurdere styrken af ethvert RNAi knockdown-reagens ved hjælp af en hurtig, følsom og omkostningseffektivβ -gal reporter assay eller identificer det bedste knockdown-reagens til RNAi-eksperimenter uden at kende proteinfunktion, western blotting eller qRT-PCR.
Sådan fungerer det:BLOCK-iT RNAi Target Screening-systemmetoden bruger enβ -galactosidaseaktivitetsanalyse for at måle knockdown-evnen af et RNAi-reagens (Stealth RNAi™ siRNA, siRNA, dicer-puljer eller shRNA-holdigt plasmid). For at identificere det mest effektive knockdown-reagens til dit mål skal du blot klone dit målgen ind i pSCREEN-iT/la cZ-DEST Gateway vektor. Co-transficer den resulterende konstruktion med knockdown-reagenset, der testes. Udtrykte gener vil blive fusioneret tilβ -galactosidase, så du kan brugeβ -galactosidaseniveauer for at måle mængden af RNAi-induceret nedbrydning af målgenet. Jo mere effektivt et specifikt knockdown-reagens er til at mediere RNAi, jo mere nedbrydning af fusions-mRNA'et vil ske, hvilket sænkerβ -gal aktivitet.
De BLOCK-iT RNAi Target Screening System inkluderer pSCREEN-iT / lac Z-DEST Gateway-vektor til generering af en konstruktion indeholdende en la cZ/gen af interesse fusion. Denne vektor har:
- ved tR-steder umiddelbart efter la cZ ORF til hurtig og effektiv rekombination med enhver ved tL-flankeret Gateway-entry-vektor for at generere la cZ/target-genfusionerne
- CMV-promotoren til stærk ekspression af la cZ/target-genfusionen, hvilket fører til øget assay-følsomhed og bedre skelnen mellem knockdown-reagenser med forskellig effektivitet
- Positionel kloning for at fusionere et gen eller fragment til 3'-enden af la cZ-genet, således atβ -galactosidase vil blive udtrykt, selvom målfragmentet, der testes, indeholder stopkodoner
RNAi, RNAi, epigenetik og ikke-kodende RNA-forskning, vektorbaseret RNAi
Tekniske data
Tekniske data
| Format | Sæt |
| Promotor | CMV |
| Produkttype | β-Galactosidase Reporter Gene Assay System |
| Reporter Gene | Beta-Gal (lacZ) |
| Indhold og opbevaring | De pSCREEN-iT™/la cZ-DEST Gateway™ Vector Kit indeholder 6μ g af vektor og 10μ g af pSCREEN-iT™ / lac Z-GW/CDK2 kontrolvektor, den positive kontrol ™Stealth RNAi la cZ, en negativ kontrol Scrambled Stealth RNAi™ siRNA og 1X annealing/fortyndingsbuffer. Opbevares ved -20 °C. De BLOCK-iT™ RNAi Target Screening Kit indeholder pSCREEN-iT™ / lac Z-DEST Gateway™ Vektorsæt, 250μ l af Lipofectamine™ 2000 reagens, og FluoReporter™la cZ/galactosidase kvantificeringskit. Opbevar Lipofectamine™ 2000 Reagens ved +4 °C. Opbevar FluoReporter™ Kit ved -20 °C beskyttet mod lys. De BLOCK-iT™ RNAi Target Screening System indeholder BLOCK-iT™ RNAi Target Screening Kit, LR Clonase™ enzymblanding, og pCR ¤ 8/GW/TOPO¤ TA Cloning Kit. Opbevar LR Clonase™ enzymblanding ved -80 °C. De pCR™ 8/GW/TOPO™ TA Cloning Sættet inkluderer klar til brug pCR™ 8/GW/TOPO™ vektor, dNTP'er, saltopløsning, vand, frem- og omvendt sekventeringsprimere, kontrolskabelon og PCR-primere, One Shot™ TOP10 Kemisk kompetent E. coli , SOC-medium og et pUC19-kontrolplasmid. Opbevar de kompetente celler ved -80 °C. Opbevar alle andre komponenter ved -20 °C. Alle komponenter er garanteret holdbare i 6 måneder, når de opbevares korrekt. |
| Prøvetype | Syntetisk siRNA, RNAi Plasmider (shRNA, miR) |
| Mængde | 20 reaktioner |
| Produktlinje | BLOCK-iT, Gateway |
| Til brug med (applikation) | RNAi målscreening |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.