Invitrogen™ En Shot™ Stbl3™ Kemisk kompetent E. coli

Et skud Stbl3 Kemisk kompetente E. coli er designet til kloning af direkte gentagelser fundet i lentivirale ekspressionsvektorer, da disse celler reducerer hyppigheden af homolog rekombination af direkte gentagelser fundet i lentivirale vektorer (ViraPower Lentiviral Expression kits) og andre retrovirale vektorer (ustabilitets-tilbøjelige HIV-baserede plasmider). De Stbl3 stamme har været afgørende for mange applikationer, herunder genomredigering af CRISPR-arbejdsgange, vaccineudvikling (herunder SARS-CoV-2-vaccineforskning), kloning og vedligeholdelse af vektorer med flere gentagelser (f.eks. genkodende protein med gentagen sekvens). Transformationseffektiviteten af One Shot Stbl3 kemisk kompetente celler er> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g plasmid DNA.

De Stbl3 stammen er afledt af HB101 E. coli- stammen med et hybrid K-12- og B-stammegenom. Den indeholder rec A13-allelen af rec A-mutationen, der reducerer uspecifik rekombinationsforekomst i klonet DNA. Mutationer i Stbl3 methyleringsafhængig restriktionssystem ( mcr B, mrr, og hsd S20) tillader konstruktion af kloning af genomisk DNA. Denne stamme har ende A1+, en uspecifik endonuklease I, der fordøjer DNA. De Stbl3 stammen giver også reproducerbart mere plasmid-DNA end DH-stammer (10 gange eller mere plasmid-DNA end TOP10 stamme) og producerer bæredygtigt lentivirus med høj titer.

Et skud Stbl3 Kemisk kompetent E. coli tilbud:
• Forventet effektivitet på> 1 x 10 ⁸ transformanter/μ g plasmid DNA
• Optimal ydeevne til udbredelse af lentivirale vektorer og vedligeholdelse af direkte gentagelser
• Forbedret genomisk DNA-kloningskapacitet ( mcr B, mrr og hsd S20)
• I stand til at producere høje DNA-udbytter

Bemærk: For optimal ydeevne og for at opretholde plasmid med komplekse gentagelsessekvenser, Stbl3 celler skal dyrkes ved 30 °C. Ved udførelse af plasmid-DNA-isolering fra Stbl3 celler, der har vildtype endonuklease I ( ende A1+), sikrer, at buffere indeholder 10 mM EDTA. EDTA vil inaktivere endonukleasen og undgå DNA-hak og vektornedbrydning (følg instruktionerne til plasmid-DNA-oprensningskit for ende A1+ E. coli- stammer).

Nemt at bruge One Shot-format
Stbl3 Kemisk kompetente E. coli -celler leveres i det praktiske enkeltreaktions One Shot-format. Enkeltrørs-engangsformatet tillader alle trin i transformationsprotokollen, op til plettering, at finde sted i det samme rør, hvilket hjælper med at spare tid og forhindre kontaminering.

Genotype F
^– mcr B mrr hsd S20(r _B , m –_B ) –rec A13 sup E44 ara -14 gal K2 lac Y1 pro A2 rps L20(StrR) xyl -5λ–leu mtl -1

Find den stamme og det format, der passer til dine behov
• Andre Stbl-stammer er tilgængelige med forskellig genetisk baggrund.
• De Stbl3 stamme er tilgængelig i MultiShot format til applikationer med høj kapacitet.