Invitrogen™ En Shot™ BL21(DE3)pLysE Kemisk Kompetent E. coli

One Shot BL21(DE3)pLysE Kemisk kompetente E. coli -celler er ideelle til brug med bakteriofag T7-promotorbaserede ekspressionssystemer såsom pRSET og pET. pLysE-plasmidet båret af BL21(DE3)pLysE-stammen producerer højere mængder af T7-lysozym end pLysS for yderligere at reducere basalniveauekspression af genet af interesse. Ligesom pLysS giver pLysE resistens over for chloramphenicol (CamR) og indeholder p15A-originet for kompatibilitet med plasmider, der indeholder ColE1- eller pMB1-originet (dvs. pUC- eller pBR322-afledte plasmider). Rekombinante proteiner, der er ikke-toksiske for E. coli, udtrykkes generelt i højere niveauer i BL21(DE3)-celler sammenlignet med BL21(DE3)pLysE-stammen med strammere ekspressionskontrol. BL21(DE3)pLysE-stammen anbefales til brug ved ekspression af toksiske gener (alternativt, BL21-AI kunne overvejes).

BL21 (DE3) E. coli -stammen er en af de mest populære værtsstammer til at producere rekombinante proteiner og tilpasset til forskning eller industrielle anvendelser (f.eks. første biofarmaceutiske rekombinante human insulin). Denne stamme var blevet konstrueret til at bæreλ DE3-lysogen, der indeholder T7 RNA-polymerasegenet under kontrol af lac UV5-promotoren. IPTG er påkrævet for at inducere ekspression af T7 RNA polymerase kaskadesystemet, som igen transskriberer det T7 promotor regulerede målgen.

BL21(DE3) er et derivat af E. coli B-stammen, der ikke indeholder lon-proteasen og også er mangelfuld i den ydre membranprotease OmpT. Manglen på to nøgleproteaser reducerer nedbrydning af heterologe proteiner udtrykt i stammerne. Derudover gør flere andre stammeegenskaber dem særligt velegnede til proteinproduktion, nemlig hurtig vækst i minimalt medium, en lavere acetatproduktion, når de dyrkes i medier med højt glucoseindhold, og evnen til at nå høj celletæthed.

One Shot BL21(DE3)pLysE kemisk kompetent E. coli tilbud:
• Transformationseffektivitet af> 1 x 10 ⁷ cfu/μ g kontrol plasmid DNA
• Ion- og OmpT-proteasemangel reducerer nedbrydning af rekombinant protein
• IPTG-inducerbar lac UV5-promotor kontrollerer ekspression af T7 RNA-polymerasen
• pLysE (CamR) plasmid til reduceret basal ekspression i ikke-inducerede celler
•hsd S-mutation muliggør effektiv transformation af umethyleret DNA
• Hurtig vækst i minimalt medium og evne til at nå høj celletæthed

BL21(DE3)pLysE E. coli er ideelle til brug med T7-promotor-baserede ekspressionsvektorer. Ligesom BL21(DE3)pLysS E. coli bærer BL21(DE3)pLysE-celler lambda DE3-lysogenet. Derudover indeholder BL21(DE3)pLysE-celler pLysE-plasmidet, som konstitutivt udtrykker T7-lysozym. T7 lysozym reducerer den basale ekspression af målgener ved at hæmme T7 RNA polymerase. pLysE-plasmidet i BL21(DE3)pLysE udtrykker højere niveauer af T7-lysozym end pLysS-plasmidet i BL21(DE3)pLysS. BL21(DE3)pLysE-stammen giver strammere kontrol af T7 RNA-polymerase, hvilket er nødvendigt, når det rekombinante protein, der skal udtrykkes, er giftigt.

Brugervenligt One Shot-format
BL21(DE3)pLysE Kemisk kompetente E. coli -celler leveres i det praktiske enkeltreaktions One Shot-format. Enkeltrørs-engangsformatet tillader alle trin i transformationsprotokollen, op til plettering, at finde sted i det samme rør, hvilket hjælper med at spare tid og forhindre kontaminering.

Genotype F
^– omp T hsd SB (r _B , m –_B ) –gal dcm (DE3) pLysE(CamR)

Find den belastning og det format, du har brug for
• Vi tilbyder andre E. coli -stammer til proteinekspression.
• Overvej for ekspression af giftige proteiner BL21-AI One Shot kemisk kompetent E. coli (kat. nr. C607003).
• BL21 Star (DE3) og andre stammer er tilgængelige i MultiShot formater til applikationer med høj kapacitet.
• Vi tilbyder en række forskellige systemer til ekspression af rekombinante proteiner i E. coli , Champion pET ekspressionssystemet giver det højeste niveau af proteinproduktion tilgængeligt i ethvert ekspressionssystem.