Få mere at vide
Invitrogen™ GeneRacer™ Kit med SuperScript™ III RT og TOPO TA Cloning™ Kit til sekvensering
Beskrivelse
De GeneRacer Kit tilvejebringer en metode til at opnå fuldlængde 5'- og 3'-ender af cDNA under anvendelse af kendt cDNA-sekvens fra udtrykte sekvensmærker (EST'er), subtraheret cDNA, differentiel visning eller biblioteksscreening. RACE PCR-produkter kan hurtigt og nemt klones ved hjælp af enten Zero Blunt TOPO PCR-kloningskit til sekventering (stumpende PCR-produkter) eller TOPO TA Cloning til Sequencing Kit (PCR-produkter med 3' A-udhæng). Ved at bruge de tilvejebragte protokoller kan cDNA-enderne af sjældne (30 kopier/celle) og lange (9 kb) transkripter amplificeres og sekventeres startende fra 1 μg totalt RNA.
- Generer cDNA fra transkripter med en længde på mindst 10 kb
- Få fuldlængde 5'-enden af sjældne transkriptioner med færre end 30 kopier pr. celle
- Klon 5'- og 3'-ender i fuld længde for at konstruere komplet cDNA-sekvens
Kloning, PCR og realtids-PCR, omvendt transkription, cDNA-biblioteker og bibliotekskonstruktion
Ordreinfo
Forsendelsestilstand: Tøris
Tekniske data
Tekniske data
| Bakterie- eller gærstamme | TOP10 |
| Kloningsmetode | TOPO TA |
| Indhold og opbevaring | Gem hvert modul som angivet: GeneRacer™ Modul (-°20 C): • 2x 1,5 ml sterilt vand • 24μ l RNaseOut™ • 6μ l hver kalve intestinal fosfatase (CIP), CIP buffer, tobakssyre pyrophosphatase (TAP), 10X TAP buffer, T4 RNA Ligase, 10X T4 RNA-ligasebuffer og 10 mM ATP • 6x 250 ng GeneRacer™ RNA Oligo • 2x 1 ml Phenol/Chloroform • 36μ l Muslingeglykogen • 200μ l Natriumacetat (3 M) • 225μ l hver GeneRacer™ 5′ Primer, 5′ Nested Primer, 3′ Primer og 3′ Indlejret Primer • 20μ l Kontrol HeLa Total RNA (500 ng/μ l) • 15μ l hver kontrolprimer A og kontrolprimer B.1 SuperScript™ III RT-modul (-20 °C) • 6μ l SuperScript™ III Omvendt Transcriptase (200 U/μ l) • 24μ l 5X First Strand Buffer • 15μ l DTT (0,1 M) • 6μ l RNaseH (2 U/μ l) • 6μ l Tilfældige primere (100 ng/μ l) • 6μ l GeneRacer™ Oligo dT Primer (900 ng/μ l) • 6μ l dNTP-mix (10 mM hver) 10 S.N.A.P.™ Kolonner (stuetemperatur) TOPO TA Cloning™ Sæt til sekvensering (-20 °C) • Tilstrækkelige reagenser og en Shot™ TOP10 Kemisk kompetent E. coli (opbevares ved -80 °C) til at klone 10 GeneRacer™ PCR-produkter; GeneRacer Modul (-°20 C), SuperScript III RT-modul (-°20 C), Kompetent E. coli (opbevares ved -°80 C), S.N.A.P. Kolonner (stuetemperatur), TOPO TA Cloning Sæt til sekvensering (-20 °C) |
| Format | Sæt |
| Til brug med (applikation) | Revers transkription |
| Inkluderer | GeneRacer Modul: 2 x 1,5 ml sterilt vand, μ24 L RNaseOut, μ6 L hver kalvetarm-phosphatase (CIP), CIP-buffer, tobakssyrepyrophosphatase (TAP), 10X TAP-buffer, T4 RNA Ligase, 10X T4 RNA-ligasebuffer og 10 mM ATP , 6 x 250 ng GeneRacer RNA Oligo , 2 x 1 ml phenol/chloroform, μ36 l muslingeglykogen, 200 μl natriumacetat (3M ), 225 μl hver GeneRacer 5' Primer, 5' Nested Primer, 3' Primer og 3' Nested Primer, 20 μL kontrol HeLa Total RNA (500ng/μ L), μ15 L hver kontrolprimer A og kontrolprimer B.1; SuperScript III RT-modul: 6 μL SuperScript III omvendt Transcriptase (200U/μ L), 24 μL 5X First Strand Buffer, 15 μL DTT (0,1 M), 6 μL RNaseH (2U/μ L), 6 μL tilfældige primere (100ng/μ L), 6 μL GeneRacer Oligo dT Primer (900ng/μ L), 6 μL dNTP-blanding (10 mM hver), 10 S.N.A.P. kolonner, TOPO TA Cloning Kit til sekventering (-20 °C), Tilstrækkelige reagenser og One Shot TOP10 Kemisk kompetent E. coli |
| Produktlinje | Generacer™ , SuperScript™ , TA Cloning™ , TOPO™ |
| Produkttype | Kloningssæt |
| Mængde | 1 sæt |
| Vektor | pCR4-TOPO TA |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.