Få mere at vide
Invitrogen™ Flp-In™ T-REx™ Kernesæt
Beskrivelse
Indeholder
pFRT/lacZeo: 20 μg, lyofiliseret i TE, pcDNA6/TR: 20 μg, lyofiliseret i TE, pOG44: 20 μg, lyofiliseret i TE, pcDNA5/FRT/TO: 20 μg, lyofiliseret i TE, pcDNA5/FRT/TO/CAT: 20 μg, lyofiliseret i TE, CMV Forward Primer (21-mer): 2 μg, lyofiliseret i TE, BGH Reverse Primer (18-mer): 2 μg, lyofiliseret i TE, Tetracyclin: 5g
- Når først Flp-InT-REx-værtscellelinje indeholdende integreret FRT-sted er blevet skabt, er efterfølgende generering af Flp-InT-REx-cellelinjer, der udtrykker gener af interesse, hurtig og effektiv
- Tillader generering af isogene, inducerbare stabile cellelinjer
- Tillader polyklonal selektion af stabile ekspressionscellelinjer
- For at generere Flp-InT-REx værtscellelinje til ekspression af gen, vil først sekventielt transficere pattedyrscellelinje med pFRT/ lac Zeo og pcDNA6/TR, som begge integreres tilfældigt og uafhængigt i værtsgenomet
- Førstnævnte indeholder FRT-sted (til homolog intermolekylær rekombination) lige nedstrøms fra initieringskodonen af lacZ-Zeocin fusion
- Sidstnævnte udtrykker konstitutivt tetracyclin repressor, som vil gøre det muligt at regulere aktiviteten af TetO 2 promotor
- Næste trin i generering af inducerbar cellelinje er at co-transficere pOG44- og pcDNA5/FRT/TO-vektorerne, hvoraf sidstnævnte indeholder gen af interesse under kontrol af tetracyclin-reguleret CMV/ TetO2 -promotor, til værtscellelinje
- Homolog rekombination mellem FRT-steder i pcDNA5/FRT/TO og på værtscellekromosom, katalyseret af Flp-rekombinase udtrykt fra pOG44, genererer afledte cellelinjer, hvori genet er blevet stabilt integreret i værtscellekromosomet
- Disse celler kan selekteres og vedligeholdes under anvendelse af hygromycin- og blasticicinresistens erhvervet som følge af rekombinationshændelse
Pattedyrsekspression, proteinekspression, proteiner, ekspression, isolering og analyse, Reguleret ekspression, målrettet integration
Tekniske data
Tekniske data
| Konstitutivt eller inducerbart system | Inducerbar |
| Leveringstype | Transfektion |
| Inducerende middel | Tetracyclin |
| Promotor | CMV/TO |
| Produkttype | Flp-In Kernesæt |
| Udvælgelsesagent (eukaryot) | Zeocin™ , Blasticidin, Hygromycin |
| Indhold og opbevaring | Hvert sæt indeholder følgende komponenter: •pFRT/lacZeo: 20μ g, lyofiliseret i TE • pcDNA6/TR: 20μ g, lyofiliseret i TE • pOG44: 20μ g, lyofiliseret i TE • pcDNA5/FRT/TO: 20μ g, lyofiliseret i TE • pcDNA5/FRT/TO/CAT: 20μ g, lyofiliseret i TE • CMV Forward Primer (21-mer): 2μ g, lyofiliseret i TE • BGH Reverse Primer (18-mer): 2μ g, lyofiliseret i TE • Tetracyklin: 5 g Sættet sendes ved stuetemperatur. Opbevar vektorer og primere ved -20 °C. Opbevar tetracyclin ved 4 °C, beskyttet mod lys. |
| Protein tag | Umærket |
| Kloningsmetode | Restriktionsenzym/MCS |
| Mængde | 1 sæt |
| Vis mere |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.