Invitrogen™ ElectroMAX™ Stbl4™ Kompetente celler

ElectroMAX Stbl4 Kompetente celler er specielt designet til kloning af ustabile inserts. Denne stamme er et derivat af Stbl2 celler (konstrueret fra JM109/J5-stamme). For at forbedre ydeevnen blev galmutationen introduceret, lon- gendannet til vildtype lon+ allel og F′ episom introduceret. De Stbl4 stammen bevarer de genetiske egenskaber Stbl2 stamme til opretholdelse af ustabile inserts såsom retrovirale sekvenser, direkte gentagelser og tandem array gener. Hertil kommer Stbl4 stamme er angiveligt brugt til opdagelse af komplekse sekundære metabolitter og CRISPR-bibliotekskonstruktion og vedligeholdelse.

Som elektrokompetente celler, Stbl4 celler kan opnå høj transformationseffektivitet af> 5 x 10 ⁹ cfu/μ g, hvilket gør dem ideelle til udfordrende applikationer såsom generering af cDNA, CRISPR og genomiske biblioteker af ustabile inserts eller brug af lavt DNA-input. Elektrokompetent Stbl4 celler er i stand til at optage og opretholde store plasmider (f.eks. 50 kb cosmider og –100 200 kb P1-kloner). Stbl4 celler indeholder også et F'-episom, hvilket gør det muligt for dem at tjene som vært for enkeltstrenget DNA, såsom M13mp-kloningsvektorer, hvis en græsplæne med DH5 αF ′IQ er tilvejebragt for at tillade plakdannelse. lac Z ΔM15 markøren giverα -supplering afβ -galactosidasegen fra pUC eller lignende vektorer og kan derfor anvendes til blå-hvid screening af kolonier på agarplader indeholdende X-gal eller Bluo-gal og IPTG. mcr A-mutationen og mcr BC -hsd RMS- mrr- deletionen tillader kloning af genomiske sekvenser, der er methylerede. Endelig øger ende -A1-mutationen i høj grad plasmidudbyttet og kvaliteten.

ElectroMAX Stbl4 kompetente cellefunktioner
• Give transformationseffektiviteter af> 5 x 10 ⁹ cfu/μ g
• Unik genotype stabiliserer direkte gentagelser og retrovirale sekvenser
•mcr A-mutationen og mcr BC- hsd RMS- mrr- deletionen tillader kloning af methylerede genomiske sekvenser
• Understøttelse af blå-hvid screening af rekombinante kloner på grund af lac ΔZ M
•15 Designet til at levere højudbytte plasmidpræparater til nedstrøms applikationer
• Stabilt F'-episom tillader isolering af ssDNA.

Formering af ustabilt og stort DNA med celler med høj transformationseffektivitet
Mange kompetente cellestammer har rec A1-genotypen, hvilket reducerer rekombination. Der er dog nogle tilfælde, hvor det DNA, som du forsøger at klone, stadig er ustabilt i sådanne celler, måske på grund af tilstedeværelsen af omvendte eller direkte gentagelser eller GC-rige områder. Mens sådanne sekvenser er relativt almindelige i eukaryote genomer, er de sjældne i E. coli . Som følge heraf kan der forekomme omlejringer, når disse sekvenser indføres i standard E. coli- stammer.

Genotype:mcr AΔ ( mcr BC- hsd RMS- mrr ) rec A1 end A1 gyr A96 gal–thi -1 sup E44λ–rel A1Δ ( lac - proAB ) / F′ [ pro AB+ lac ΔIqZ M15 Tn 10(TetR)]

Find den belastning og det format, der passer til dine behov
• Stbl-stammer er tilgængelige med en række genetiske baggrunde.
• De Stbl3 stamme er tilgængelig i MultiShot format til applikationer med høj kapacitet.
• MAX Efficiency DHα5 ´F IQ Kompetente celler (kat. nr. 18288019) er tilgængelige i kemisk kompetent format.

Noter
• Inkuber for at maksimere stabilisering af direkte gentagelser og retrovirale sekvenser Stbl4 celler og udføre ekspressionsundersøgelser ved 30 °C.
• Et højspændingselektroporationsapparat er påkrævet.
• Stbl4 stammegenomsekvenser er tilgængelige i NCBI GenBank database under adgangsnumrene CP076043.1 og CP076044.1 (Assad et al. 2021).