Invitrogen™ Dynabeads™ MyOne™ Tosylaktiveret

Når du ønsker at koble antistoffer, peptider, intakte proteiner og funktionelle enzymer kovalent til overfladen af en magnetisk perle, skal du vælge Dynabeads Tosylaktiveret. Optimal antistoforientering gør disse perler til et glimrende valg til immunpræcipitation af proteiner og proteinkomplekser.

Ideel til immunpræcipitation af proteinkomplekser:
Lav baggrund og kovalent binding af antistoffer til perlens overflade danner Dynabeads Tosylaktiveret et fremragende valg til immunpræcipitation af proteiner og proteinkomplekser (Co-Immunoprecipitation, Co-IP). Blid og hurtig magnetisk koncentration af perlerne og korte inkubationstider (mulig på grund af hurtig overfladebaseret bindingskinetik) gør Dynabeads Tosylaktiveret et glimrende valg til immunpræcipitation af meget labile eller og/eller forbigående (kortlivede) proteinkomplekser.

Perleoverfladeegenskaber for Dynabeads Tosylaktiveret:
• p-toluen-sulfonyl (Tosyl) grupper
• Hydrofob, pH-neutral
• Kovalent binding af primær amin (NH ₂ ) eller sulfhydryl (SH) grupper

Ultrahurtige protokoller:
• Identificer medlemmer af proteinkomplekser på minutter i stedet for timer
• Tidsmæssig opløsning kort nok til at identificere forbigående og labile komplekser
• Identificer bindingspartnere, der ikke kan identificeres med længere protokoller
• Hurtige protokoller reducerer den allerede ultralave baggrundsbinding yderligere
• Stærkere signal til støj-forhold

Anvendelser:
• IP af proteiner og proteinkomplekser
• Koble funktionelle enzymer til perleoverfladen til downstream-assays
• Par peptider til perleoverfladen for at identificere bindemidler

Rens peptider, proteiner og enzymer, der er:
• Forbigående stabil
• Strukturelt intakt
• Temperatur labil
• I deres oprindelige konformation og

funktionelle koblingsprocedure skitserer:
Kovalent kobling udføres natten over ved at inkubere den ønskede ligand med Dynabeads Tosylaktiveret. Ligander almindeligvis koblet til Dynabeads Tosylaktiverede indbefatter peptider og proteiner (f.eks. antistoffer til immunpræcipitation eller co-immunpræcipitation). Kobling sker ved neutral til høj pH og ved 37 °C. Vi anbefaler kobling ved pH 8,5-9,5, men for pH-labile ligander kan kobling udføres i en alternativ buffer ved pH 7,4.

Efter afslutning af ligandkoblingstrinnet vil den faktiske Dynabeads Tosylaktiveret overfladebelægning vil blive gjort inert, hvilket resulterer i lav ikke-specifik binding.

Bindingskapacitet pr. milligram perler:
Varierer afhængigt af ligand (f.eks. 14-19μ g IgG)

Om Dynabeads:
Dynabeads er ikke-porøse monodisperse superparamagnetiske perler. De er meget mobile i opløsning, hvilket gør det muligt for ligander koblet til perlerne kontinuerligt at interagere med hele prøvevolumenet. De superparamagnetiske perler trækkes til rørets vægge ved at overføre røret til et stativ, der indeholder et stærkt magnetfelt. Stærke magnetiske felter trækker hurtigt perlerne til rørvæggen, hvilket muliggør nem og fuldstændig fjernelse af supernatanten med pipette. Vasketrin udføres på samme måde.