Få mere at vide
Invitrogen™ BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi-ekspressionssystem
Beskrivelse
Udvider de potentielle RNAi-applikationer ud over andre traditionelle retrovirale systemer (Naldini, 1998). De BLOCK-iT Lentiviral Pol II miR RNAi-ekspressionssystem inkluderer:
o A BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector Kit til fremstilling af en ekspressionsklon indeholdende et dobbeltstrenget oligonukleotid, der koder for en præ-miRNA-sekvens til ekspression i pattedyrsceller. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi-ekspressionsvektor (pcDNA 6.2-™GW/miR) giver en hurtig og effektiv måde at klone ds oligo-duplekser, der koder for en ønsket miRNA-målsekvens, ind i en vektor, der indeholder en Pol II-promotor (CMV) til brug i RNAi-analyse. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi-ekspressionsvektor er specifikt designet til at tillade ekspression af miRNA-sekvenser og indeholder specifikke miR-flankerende sekvenser, der tillader korrekt behandling af miRNA'et.
™o pDONR 221-vektoren til at overføre premiRNA-ekspressionskassetten til det lentivirale ekspressionsplasmid vha. Gateway™ Teknologi. Gateway-teknologien er en universel kloningsmetode, der udnytter de stedspecifikke rekombinationsegenskaber af bakteriofag lambda (Landy, 1989) til at give en hurtig og yderst effektiv måde at flytte din DNA-sekvens af interesse ind i flere vektorsystemer.
o A pLenti6/V5-DEST destinationsvektor, hvori præ-miRNA-kassetten fra ekspressionsklonen overføres ved hjælp af Gateway-teknologi. Dette ekspressionsplasmid indeholder elementer, der tillader pakning af konstruktionen i virioner og Blasticidin-resistensmarkøren til selektion af stabilt transducerede cellelinjer.
o Gateway BP og LR Clonase™ II-enzymblandinger, der letter overførslen af præ-miRNA-ekspressionskassetten fra ekspressionsvektoren til
pLenti6/V5-DEST destinationsvektor.
o Komponenter af ViraPower Lentiviralt system til produktion af et replikations-inkompetent lentivirus, der stabilt udtrykker miRNA'et af interesse i både delende og ikke-delende pattedyrsceller. De ViraPower Lentiviral teknologi letter højeffektiv, in vitro eller in vivo levering af et målgen eller RNA til delende og ikke-delende pattedyrceller ved hjælp af en replikationsinkompetent lentivirus. Baseret på lentikat™ system udviklet af Cell Genesys (Dull et al., 1998), den ViraPower Lentiviral teknologi besidder funktioner, der øger dens biosikkerhed, samtidig med at den tillader ekspression på højt niveau i en bredere række af celletyper end traditionelle retrovirale systemer.
Kloning, Gateway-kloning, Lentiviral shRNA og miRNA, RNAi, RNAi, epigenetik og ikke-kodende RNA-forskning, virusbaseret RNAi
Tekniske data
Tekniske data
| Produkttype | RNAi Expression Vector Kit |
| Indhold og opbevaring | De BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System indeholder BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit som indeholder to kasser. Kloningsboksen indeholder lineariseret pcDNA ™6,2-GW/miR, 10X annealing-buffer, T4 DNA-ligase, 5X DNA-ligeringsbuffer, lacZ-kontrololigo, lacZ-kontrolplasmid, negativ kontrolplasmid, DNase/RNase-frit vand og fremadgående og omvendte sekventeringsprimere. Opbevar vektorerne, bufferne, kontrololigo og plasmider, vand og sekventeringsprimere ved -20 °C. Den ene Shot™ æsken indeholder transformationsreagenser inklusive enogtyve 50-μ l alikvoter af One Shot™ TOP10 Kemisk kompetent E. coli, SOC medium og et pUC19 supercoiled kontrolplasmid. Opbevar disse transformationsreagenser -80 °C. Alle reagenser er garanteret stabile i 6 måneder, når de opbevares korrekt. De BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System inkluderer også alle de nødvendige reagenser til Gateway™ kloning ind i det lentivirale ekspressionssystem, herunder: pLenti6/V5-DEST Vektor, pLenti6-V5/GW-lacZ kontrol, ™pDONR 221, ViraPower™ Lentiviral Bsd Support Kit (ViraPower™ Emballage blanding, Lipofectamine™ 2000 transfektionsreagens og Blasticidin), 293FT Cell Line, One Shot™ Stbl3™ Kemisk kompetent E. coli, One Shot™ TOP10 Kemisk kompetent E. coli, og Gateway™ LR og BP Clonase™ II Enzymblandinger. Opbevar Lipofectamine™ 2000 reagens ved +4 °C (må ikke fryses). Gem vektorerne, ViraPower™ Emballagemix, Blasticidin og begge dele Clonase™ II Enzymblandinger ved -20 °C. Opbevar de kompetente celler ved -80 °C. Opbevar 293FT-cellelinjen i flydende nitrogen. Alle reagenser er garanteret stabile i 6 måneder, når de opbevares korrekt. |
| Kloningsmetode | Gateway™ |
| Konstitutivt eller inducerbart system | Konstitutiv |
| Leveringstype | Lentiviral |
| RNAi type | miRNA |
| Udvælgelsesagent (eukaryot) | Blasticidin |
| Vektor | pLenti |
| Promotor | CMV |
| Produktlinje | BLOCK-iT , Gateway |
| Vis mere |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.