Invitrogen™ BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi-ekspressionssystem med EmGFP

Udvider de potentielle RNAi-applikationer ud over andre traditionelle retrovirale systemer (Naldini, 1998). De BLOCK-iT Lentiviral Pol II miR RNAi-ekspressionssystem med EmGFP inkluderer:
o A BLOCK-iT Pol II miR RNAi Expression Vector Kit til fremstilling af en ekspressionsklon indeholdende et dobbeltstrenget oligonukleotid, der koder for en præ-miRNA-sekvens til ekspression i pattedyrsceller. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi-ekspressionsvektor (pcDNA 6.2-™GW/EmGFP-miR) giver en hurtig og effektiv måde at klone ds oligo-duplekser, der koder for en ønsket miRNA-målsekvens, i en vektor indeholdende en Pol II-promotor (CMV) til brug i RNAi-analyse. De BLOCK-iT Pol II miR RNAi-ekspressionsvektor er specifikt designet til at tillade ekspression af miRNA-sekvenser og indeholder specifikke miR-flankerende sekvenser, der tillader korrekt behandling af miRNA'et.
o Co-cistronisk ekspression af en Emerald GFP (EmGFP) reporter i pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR vektoren, hvilket resulterer i meget stærk korrelation af EmGFP ekspression med knockdown aktiviteten af dit miRNA
o ™pDONR 221-vektoren til at overføre premiRNA-ekspressionskassetten til det lentivirale ekspressionsplasmid vha. Gateway™ Teknologi. Gateway-teknologien er en universel kloningsmetode, der udnytter de stedspecifikke rekombinationsegenskaber af bakteriofag lambda (Landy, 1989) til at give en hurtig og yderst effektiv måde at flytte din DNA-sekvens af interesse ind i flere vektorsystemer.
o A pLenti6/V5-DEST destinationsvektor, hvori præ-miRNA-kassetten fra ekspressionsklonen overføres ved hjælp af Gateway-teknologi. Dette ekspressionsplasmid indeholder elementer, der tillader pakning af konstruktionen i virioner og Blasticidin-resistensmarkøren til selektion af stabilt transducerede cellelinjer.
o Gateway BP og LR Clonase™ II-enzymblandinger, der letter overførslen af præ-miRNA-ekspressionskassetten fra ekspressionsvektoren til pLenti6/V5-DEST destinationsvektor.
o Komponenter af ViraPower Lentiviralt system til produktion af et replikations-inkompetent lentivirus, der stabilt udtrykker miRNA'et af interesse i både delende og ikke-delende pattedyrsceller. De ViraPower Lentiviral teknologi letter højeffektiv, in vitro eller in vivo levering af et målgen eller RNA til delende og ikke-delende pattedyrceller ved hjælp af en replikationsinkompetent lentivirus. Baseret på lentikat™ system udviklet af Cell Genesys (Dull et al., 1998), den ViraPower Lentiviral teknologi besidder funktioner, der øger dens biosikkerhed, samtidig med at den tillader ekspression på højt niveau i en bredere række af celletyper end traditionelle retrovirale systemer.

Kloning, Gateway-kloning, Lentiviral shRNA og miRNA, RNAi, RNAi, epigenetik og ikke-kodende RNA-forskning, virusbaseret RNAi