Invitrogen™ En Shot™ BL21-AI™ Kemisk kompetent E. coli

Et skud BL21-AI Kemisk kompetente E. coli - celler er designet til anvendelser, der kræver stram regulering og stærk ekspression af toksiske proteiner fra ethvert T7-promotor-baseret ekspressionssystem. Et derivat af E. coli B-stammen, BL21-AI indeholder ikke lon-proteasen og er bevidst mangelfuld i den ydre membranprotease OmpT.

Manglen på to nøgleproteaser reducerer nedbrydning af heterologe proteiner udtrykt i stammen. Derudover gør flere andre stammeegenskaber disse celler særligt velegnede til proteinproduktion, nemlig hurtig vækst i minimalt medium, en lavere acetatproduktion, når de dyrkes i medier med højt glukoseindhold, og evnen til at nå høj celletæthed.

BL21-AI E. coli indeholder en kromosomal indsættelse af en kassette indeholdende T7 RNA-polymerasen (T7RNAP) i ara B-locuset af ara BAD-operonen, hvilket placerer regulering af T7 RNAP under kontrol af den arabinose-inducerbare ara BAD-promotor. ara B-genet er deleteret i denne stamme. Tilstedeværelsen af tet A-genet bibringer resistens over for tetracyclin og tillader verifikation af stammeidentitet under anvendelse af tetracyclin. Udbyttet af rekombinant protein opnået fra BL21-AI svarer generelt til den, der opnås fra BL21 (DE3). BL21-AI, på ’grund af dets kvaliteter og genomiske baggrund, blev brugt til at belyse grundlæggende trin i tilpasningsprocessen af CRISPR/Cas-systemet. Et skud BL21-AI Kemisk kompetente celler har en transformationseffektivitet på> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g plasmid DNA.

Et skud BL21-AI Kemisk kompetent E. coli tilbud:
• Transformationseffektivitet af> 1 x 10 ⁸ cfu/μ g kontrol plasmid DNA
• Ion- og OmpT-proteasemangel, der reducerer nedbrydning af rekombinant protein
• T7 RNA-polymerase kontrolleret af den stramt regulerede arabinose-inducerbare ara BAD-promotor
•hsd S-mutation, der muliggør effektiv transformation af umethyleret DNA
• Ideel til at inducere ekspression af toksisk protein fra ethvert T7-promotor-

baseret plasmid Brugervenligt One Shot-format
BL21-AI Kemisk kompetente E. coli -celler leveres i det praktiske enkeltreaktions One Shot-format. Enkeltrørs-engangsformatet tillader alle trin i transformationsprotokollen, op til plettering, at finde sted i det samme rør, hvilket hjælper med at spare tid og forhindre kontaminering.

Genotype
F^– omp T hsd S _B (r _B , m^– _B ^–) gal dcm ara B::T7RNAP- tet A

Find den stamme og det format, der passer til dine behov
Vi tilbyder flere E. coli- stammer til proteinekspression.
BL21 Star (DE3) og andre stammer er tilgængelige i MultiShot formater til applikationer med høj kapacitet.
Vi tilbyder en række forskellige systemer til ekspression af rekombinante proteiner i E. coli. Champion pET-ekspressionssystemet giver det højeste niveau af proteinproduktion, der er tilgængeligt i ethvert ekspressionssystem.

Noter
• For at inducere ekspression fra ara BAD-promotoren skal du bruge L-arabinose. For at undertrykke basal ekspression fra ara BAD-promotoren skal du bruge glucose. Selvom glukose er fraværende, er basalekspression fra generelt lav.
• BL21-AI stamme genomsekvenser tilgængelige i NCBI GenBank database under adgangsnummer CP047231 (Bhawsinghka et al. 2020).