Invitrogen™ Image-iT™ LIVE Red and Green Caspase Apoptosis Detection Kits til mikroskopi

De Image-iT LIVE røde og grønne caspase-detektionssæt til mikroskopi anvender en ny tilgang til at detektere aktive caspaser: begge analysesæt drager fordel af en fluorescerende hæmmer af caspaser (FLICA ) metode, som er et affinitetsmærke. Dette reagens forbinder en fluormethylketon (FMK) del, som kan reagere kovalent med et cystein, med en caspase-specifik aminosyresekvens. Forskellige aminosyregenkendelsessekvenser bruges til at detektere forskellige caspaser: valin-alanin-asparaginsyre (VAD) til poly-caspaser (herunder caspase-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8 og -9), og asparaginsyre-glutaminsyre-valin-asparaginsyre (DEVD) til caspase 3/7. En sulforhodamin (SR ) gruppe eller carboxyfluorescein (FAM ) gruppe er tilknyttet som reporter.

De FLICA reagens menes at interagere med det enzymatiske reaktive center af en aktiveret caspase via genkendelsessekvensen og derefter at binde kovalent gennem FMK-delen. De FLICA inhibitor er cellegennemtrængende og ikke-cytotoksisk. Ubundet FLICA molekyler diffunderer ud af cellen og vaskes væk; det resterende røde eller grønne fluorescerende signal er et direkte mål for mængden af aktiv caspase til stede på det tidspunkt, hvor inhibitoren blev tilsat. De omtrentlige excitations- og emissionstoppe for FLICA propidiumiodid og Hoechst 33342 reagenser er 488⁄ nm/530 nm, 535⁄ nm/6617 nm og 350 nm/⁄ 461 nm, hhv. Detektionsreagenserne inkluderet i Image-iT LIVE Red Poly Caspases, Red Caspase-3/7, Green Poly Caspases og Green Caspase-3/7 Detection kits er henholdsvis SR-VAD-FMK, SR-DEVD-FMK, FAM-VAD-FMK og FAM-DEVD-FMK.