Thermo Scientific™ Uracil-DNA Glycosylase (1 U/μ L)

• Aktiv i Fermentas-buffere til restriktionsenzymer og termofile polymeraser
• Kilde: E. coli K12-celler
• Molekylvægt: 25,6 kDa monomer

• Fraværet af endo-, exodeoxyribonukleaser, phosphataser og ribonukleaser bekræftet ved passende kvalitetstests

Kilde:

• E. coli K12-celler

Molekylvægt:

• 25,6 kDa monomer

Definition af aktivitetsenhed:

• En enhed af enzymet katalyserer frigivelsen af 1 nanomol uracil fra uracil-holdig DNA-skabelon på 60 min. ved 37 °C

• 30 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,05 % (v/v) Tween 20 og 50 % (v/v) glycerol

10X reaktionsbuffer:

• 200 mM Tris-HCl (pH 8,2 ved 25 °C), 10 mM EDTA, 100 mM NaCl

• Inhibitorer: Ugi-protein fra Bacillus subtilis -fagen PBS2, protein p56 fra Bacillus subtilis- fagen phi29 (7).
• Inaktiveres ved opvarmning ved °95 C i 10 min. Enzymaktiviteten genoprettes delvist ved temperaturer lavere end 55 °C. Læg derfor PCR-produkter på is efter PCR og fyld direkte på en gel

Anbefalet til:

Kontrol af overført kontaminering i PCR (2); Glycosylasemedieret enkeltnukleotidpolymorfidetektion (GMPD) (3); Sted-rettet mutagenese (4); Som en probe til protein-DNA-interaktionsundersøgelser (5); SNP genotypebestemmelse; Kloning af PCR-produkter (6); Generering af enkeltstrengede udhæng af PCR-produkter og cDNA

Bemærk:

De abasiske steder dannet i DNA af Uracil-DNA Glycosylase kan efterfølgende spaltes ved varme, alkalibehandling eller endonukleaser, der spalter specifikt på abasiske steder. UDG (UNG) er aktiv i nærvær eller fravær af divalente kationer.