Thermo Scientific™ Terminal deoxynukleotidyltransferase (20 U/μ L)

• Inkorporerer modificerede nukleotider (f.eks. fluorescein-, biotin-, aminoallyl-mærkede nukleotider) Kilde: E. coli -celler, der bærer et klonet gen, der koder for kalvethymus-terminal deoxynukleotidyltransferase

• Fraværet af endo-, exodeoxyribonukleaser, phosphataser og ribonukleaser bekræftet ved passende kvalitetstests

Kilde:

• E.coli -celler, der bærer et klonet gen, der koder for kalvethymus-terminal deoxynukleotidyltransferase

• En enhed af enzymet katalyserer inkorporeringen af 1 nmol deoxythymidylat i en polynukleotidfraktion (adsorberet på DE-81) på 60 min. ved 37 °C
• Enzymaktivitet analyseres i følgende blanding:
• 200 mM kaliumcacodylat (pH 7,2), 1 mM _CoCl2 , 0,01 % (v/v) Triton X-100 , 10 μM oligo(dT) ₁₀ , 1 mM dTTP og 0,4MBq/ml [ ^3H ]-dTTP
Opbevaringsbuffer:
• Enzymet leveres i: 100 mM kaliumacetat (pH 6,8), 2 mM 2-mercaptoethanol, 0,01 % (v/v) Triton X-100 og 50% (v/v) glycerol

5X reaktionsbuffer:

• 1 M kaliumcacodylat, 125 mM Tris, 0,05 % (v/v) Triton X-100 , 5 mM _CoCl2 (pH 7,2 ved 25 °C)

Hæmning og inaktivering:

• Inhibitorer: metalchelatorer, ammonium, chlorid, iodid, fosfationer
• Inaktiveres ved opvarmning ved 70 °C i 10 min. eller ved tilsætning af EDTA

Anbefalet til:

Fremstilling af syntetiske homo- og heteropolymerer (1); Homopolymer haledannelse af lineært dupleks-DNA med en hvilken som helst type 3'-OH-terminal (2, 3); Oligodeoxyribonukleotid og DNA-mærkning (2, 4-8); 5'-RACE (hurtig amplifikation af cDNA-ender) (9); In situ lokalisering af apoptose (10)

Bemærk:

På grund af tilstedeværelsen af _CoCl2TdT Reaktionsbuffer er inkompatibel med downstream-applikationer. Det er nødvendigt at fjerne CoCl ₂ fra reaktionsblandingen ved hjælp af spinsøjle eller phenol/chloroform-ekstraktion og efterfølgende ethanolfældning.