Thermo Scientific™ PstI (10 U/μ L)

5'..CTGCA▵G...3'

3'..G▵ACGT C...5'

Betingelser for 100 % aktivitet

• 1 X buffer O: 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 ved 37 °C), 10 mM _MgCl2 , 100 mM NaCl og 0,1 mg/ml BSA
• Inkuber ved 37 °C

Opbevaringsbuffer

• PstI leveres i: 10 mM Tris-HCl (pH 7,4 ved 25 °C), 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 0,15 % Triton X-100 0,2 mg/ml BSA og 50% (v/v) glycerol

Ligering og genudspaltning

• Efter 50 gange overfordøjelse med PstI, kan mere end 95 % af DNA-fragmenterne ligeres og skæres igen

Methyleringseffekter

• Dam: overlapper aldrig— ingen effekt
• Dcm: overlapper aldrig— ingen effekt
• CpG: overlapper aldrig— ingen effekt
• EcoKI: overlapper aldrig— ingen effekt
• EcoBI: overlapper aldrig— ingen effekt

Fordøjelse af agarose-indlejret DNA

• Minimum 5 enheder af enzymet er påkrævet for fuldstændig fordøjelse af μ1 g agarose-indlejret lambda-DNA på 16 timer

Kompatible ender

• Alw21I, ApaI, BseSI, Eco24I, Mph1103I, PstI, SacI, SdaI

Bemærk:

Betingelser med høj pH, lavt saltindhold, højt glycerol, 8 % DMSO kan forårsage stjerneaktivitet (Malyguine, E., et al., Gene, 8, 163-177, 1980). Omgivende sekvenser: tilstedeværelsen af tilstødende kørsler af GC-basepar giver betydelig modstand mod spaltning (Armstrong, K. og Bauer, WR, NAR, 10, 993-1007, 1982). 100 % dUTP-inkorporering ved genkendelsesstedet reducerer PstI-spaltning til 25 % (Glenn, TC, et al., Biotechniques, 17, 1086-1090, 1994). PstI vil ikke skære AGCTGCAG, når det methyleres med AluI-methyltransferase.