Få mere at vide
Thermo Scientific™ CloneJET PCR-kloningskit
Shop alle Thermo Scientific produkter
Beskrivelse
CloneJET PCR Cloning Kit er et avanceret positivt selektionssystem til højeffektiv kloning af PCR-produkter genereret med enhver termostabil DNA-polymerase. Ethvert andet stumpt eller klæbrig-ende DNA-fragment kan klones. Den er ideel til phosphorylerede eller ikke-phosphorylerede DNA-fragmenter. Ligering ind i den inkluderede positive selektionsvektor tager kun 5 minutter, hvilket giver mere end 99 % rekombinante kloner. Blunt-endede PCR-produkter genereret med et korrekturlæsningsenzym ligeres direkte ind i kloningsvektoren.
PCR-produkter, der er genereret enten med ikke-korrekturlæsende DNA-polymeraser eller blandinger af DNA-polymeraser, afstumpes før ligering på 5 minutter med det termostabile DNA Blunting Enzyme, der følger med sættet. Alle almindelige laboratorie- E. coli- stammer kan transformeres direkte med ligeringsproduktet.
Sættet indeholder en ny, klar-til-brug positiv selektionskloningsvektor pJET1.2/stump. Vektoren indeholder et letalt restriktionsenzymgen, der afbrydes ved ligering af et DNA-insert i kloningsstedet. Som et resultat er kun bakterieceller med rekombinante plasmider i stand til at danne kolonier. Recirkulariserede pJET1.2/stumpe vektormolekyler, der mangler et insert, udtrykker et letalt restriktionsenzym, som dræber værts -E.coli- cellen efter transformation. Denne positive selektion accelererer drastisk processen med koloniscreening og eliminerer yderligere omkostninger, der kræves til blå/hvid selektion. For nemheds skyld ved kortlægning og manipulation af insertionen indeholder pJET1.2/stump kloningsvektorens multiple kloningssted to BglII-genkendelsessekvenser, der flankerer insertionsstedet. Derudover indeholder vektoren en T7-promotor til in vitro og in vivo transkription såvel som sekventering af insertet.
- Hurtig —PCR-kloning på kun 5 minutter
- Højeste effektivitet— >99 % af positive kloner
- Ingen kloningsbaggrund —positiv selektionsvektor
- Alsidig —ideel til stump-ende eller sticky-end kloning
- Økonomisk —ingen dyr blå/hvid afskærmning
Anbefalet til:
Kloning af stumpende eller 3'-dA-halede PCR-produkter op til 10 kb; Kloning af DNA-fragmenter genereret af restriktionsenzymer; Sekventering af klonet DNA; In vitro og in vivo transkription af klonede inserts fra T7-promotoren
Bemærk:
Før elektroporering skal ligeringsblandingen altid søjlerenses ved hjælp af f.eks. GeneJET PCR rensningssæt,† K0701, eller chloroform ekstrakt kit. Elektroporation hæmmes af tilstedeværelsen af proteiner og salte i blandingen.
Tekniske data
Tekniske data
| Antibiotikaresistens bakteriel | Ampicillin (AmpR) |
| Kloningsmetode | Restriktionsenzym⁄ MCS, Blunt PCR |
| Format | Sæt |
| Prøvetype | PCR produkter |
| Til brug med (applikation) | PCR-kloning |
| Antal reaktioner | 40 reaktioner |
| Produktlinje | CloneJET |
| Produkttype | Kloningssæt |
| Mængde | 40 reaktioner |
| Vektor | pJET1,2/stump |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.