Få mere at vide
Beskrivelse
CloneJET PCR Cloning Kit er et avanceret positivt selektionssystem til højeffektiv kloning af PCR-produkter genereret med enhver termostabil DNA-polymerase. Ethvert andet stumpt eller klæbrig-ende DNA-fragment kan klones. Den er ideel til phosphorylerede eller ikke-phosphorylerede DNA-fragmenter. Ligering ind i den inkluderede positive selektionsvektor tager kun 5 minutter, hvilket giver mere end 99 % rekombinante kloner. Blunt-endede PCR-produkter genereret med et korrekturlæsningsenzym ligeres direkte ind i kloningsvektoren.
PCR-produkter, der er genereret enten med ikke-korrekturlæsende DNA-polymeraser eller blandinger af DNA-polymeraser, afstumpes før ligering på 5 minutter med det termostabile DNA Blunting Enzyme, der følger med sættet. Alle almindelige laboratorie- E. coli- stammer kan transformeres direkte med ligeringsproduktet.
Sættet indeholder en ny, klar-til-brug positiv selektionskloningsvektor pJET1.2/stump. Vektoren indeholder et letalt restriktionsenzymgen, der afbrydes ved ligering af et DNA-insert i kloningsstedet. Som et resultat er kun bakterieceller med rekombinante plasmider i stand til at danne kolonier. Recirkulariserede pJET1.2/stumpe vektormolekyler, der mangler et insert, udtrykker et letalt restriktionsenzym, som dræber værts -E.coli- cellen efter transformation. Denne positive selektion accelererer drastisk processen med koloniscreening og eliminerer yderligere omkostninger, der kræves til blå/hvid selektion. For nemheds skyld ved kortlægning og manipulation af insertionen indeholder pJET1.2/stump kloningsvektorens multiple kloningssted to BglII-genkendelsessekvenser, der flankerer insertionsstedet. Derudover indeholder vektoren en T7-promotor til in vitro og in vivo transkription såvel som sekventering af insertet.
- Hurtig —PCR-kloning på kun 5 minutter
- Højeste effektivitet— >99 % af positive kloner
- Ingen kloningsbaggrund —positiv selektionsvektor
- Alsidig —ideel til stump-ende eller sticky-end kloning
- Økonomisk —ingen dyr blå/hvid afskærmning
Anbefalet til:
Kloning af stumpende eller 3'-dA-halede PCR-produkter op til 10 kb; Kloning af DNA-fragmenter genereret af restriktionsenzymer; Sekventering af klonet DNA; In vitro og in vivo transkription af klonede inserts fra T7-promotoren
Bemærk:
Før elektroporering skal ligeringsblandingen altid søjlerenses ved hjælp af f.eks. GeneJET PCR rensningssæt,† K0701, eller chloroform ekstrakt kit. Elektroporation hæmmes af tilstedeværelsen af proteiner og salte i blandingen.
Tekniske data
Tekniske data
| Antibiotikaresistens bakteriel | Ampicillin (AmpR) |
| Kloningsmetode | Restriktionsenzym⁄ MCS, Blunt PCR |
| Format | Sæt |
| Prøvetype | PCR produkter |
| Til brug med (applikation) | PCR-kloning |
| Antal reaktioner | 40 reaktioner |
| Produktlinje | CloneJET |
| Produkttype | Kloningssæt |
| Mængde | 40 reaktioner |
| Vektor | pJET1,2/stump |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.