Thermo Scientific™ BplI (5 U/μ L)

5'...▵ ₈ (N) GAG (N) ₅ CTC (N) ₁₃ ▵...3'

3'...▵ ₁₃ (N) CTC (N) ₅ GAG (N) ₈ ▵...5'

Betingelser for 100 % aktivitet:

• [1X buffer Tango™ ] + SAM: [33 mM Tris-acetat (pH 7,9 ved 37 °C), 10 mM Mg-acetat, 66 mM K-acetat og 0,1 mg/ml BSA] + 0,05 mM S-adenosylmethionin
• Inkuber ved 37 °C

Opbevaringsbuffer:

• BplI leveres i: 10 mM Tris-HCl (pH 7,4 ved 25 °C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0,2 mg/ml BSA og 50 % (v/v) glycerol

Ligering og genudspaltning:

• Efter 10 gange overfordøjelse med BplI kan mere end 70 % af DNA-fragmenterne ligeres, men ingen af disse kan genklippes på grund af methyleringen af genkendelsessekvensen med dette enzym

Methyleringseffekter:

• Dam: overlapper aldrig— ingen effekt
• Dcm: overlapper aldrig— ingen effekt
• CpG: kan overlappe— ingen effekt
• EcoKI: overlapper aldrig— ingen effekt
• EcoBI: overlapper aldrig— ingen effekt

Fordøjelse af agarose-indlejret DNA:

• Minimum 10 enheder af enzymet er nødvendige for fuldstændig fordøjelse af μ1 g agarose-indlejret lambda-DNA på 16 timer

Bemærk:

BplI kræver kun ^Mg2 + for sin aktivitet, men stimuleres af S-adenosylmethionin. 0,05 mM S-adenosylmethionin giver mere end en 100-fold stigning i BplI-aktivitet. Alligevel er fuldstændig spaltning af nogle substrater med BplI vanskelig at opnå. BplI-koncentration bestemmes af det maksimale spaltningsniveau, der opnås, når der ikke observeres nogen ændring i fragmenteringsmønsteret med yderligere enzymstigning.