Få mere at vide
Beskrivelse
Konventionelle restriktionsendonukleaser er en stor samling af højkvalitets restriktionsenzymer, optimeret til at arbejde i en af bufferne i Five Buffer System. Derudover leveres den universelle Tango-buffer for bekvemmelighed ved dobbeltfordøjelser. Alle enzymerne udviser 100 % aktivitet under de anbefalede buffer- og reaktionsbetingelser. For at sikre ensartet ydeevne, Thermo Scientific restriktionsenzymreaktionsbuffere indeholder forblandet BSA, som øger stabiliteten af mange enzymer og binder kontaminanter, der kan være til stede i DNA-præparater.
5'...CACCTGC (N) 4 ▵...3'
3'...GTGGACG (N) 8 ▵...5'
Betingelser for 100 % aktivitet:
- [1X Buffer AarI] + oligonukleotid:
- [10 mM Bis-Tris Propan-HCl (pH 6,5 ved °37 C), 10 mM MgCl2, 100 mM KCl, 0,1 mg/ml BSA] + 0,5 μM oligonukleotid (se note)
- Inkuber ved 37 °C
Opbevaringsbuffer:
- AarI leveres i:
- 10 mM kaliumphosphat (pH 7,4 ved 25 °C), 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA og 50 % (v/v) glycerol
Ligering og genudspaltning:
- Efter 10 gange overfordøjelse med AarI, kan mere end 95% af DNA-fragmenterne ligeres og genkkæres
Methyleringseffekter:
- Dam: overlapper aldrig— ingen effekt
- Dcm: overlapper aldrig— ingen effekt
- CpG: kan overlappe hinanden— spaltningsforringet
- EcoKI: overlapper aldrig— ingen effekt
- EcoBI: kan overlappe hinanden— effekt ikke bestemt
Fordøjelse af agarose-indlejret DNA:
- Der kræves minimum 5 enheder af enzymet til fordøjelse af μ1 g agarose-indlejret lambda-DNA på 16 timer
Bemærk:
Til spaltning med AarI kræves mindst to kopier af dets genkendelsessekvens. Inkludering af μ0,5 M oligonukleotid med AarI-genkendelsessekvensen i reaktionsblandingen forbedrer signifikant spaltning af DNA'er, især af dem med et enkelt AarI-sted. Alligevel er en fuldstændig spaltning af nogle substrater med AarI vanskelig at opnå. Mere end 10 gange overfordøjelse med AarI kan resultere i stjerneaktivitet. AarI kan forblive forbundet med det spaltede DNA. Dette kan forårsage DNA-båndskifte under elektroforese. For at undgå atypiske DNA-båndmønstre skal du bruge 6X DNA Loading Dye& SDS-opløsning til prøveforberedelse eller opvarm det fordøjede DNA i nærvær af SDS før elektroforese.
Tekniske data
Tekniske data
| Koncentration | 2 U/μl |
| Methyleringsfølsomhed | CpG-methyleringsfølsom, Ikke Dam-methyleringsfølsom, Ikke Dcm-methyleringsfølsom |
| Enzym | AarI |
| Kompatibel buffer | Unik buffer (10X buffer AarI) |
| Følsom over for varmeinaktivering | Ja |
| Optimal reaktionstemperatur | 37 °C |
| Type IIS RE | Nej |
| Mængde | 25 enheder |
| Produkttype | Restriktionsenzym |
| Forskningskategori | Traditionel kloning |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.