MP Biomedicals™ FastCellular™ Senescence Detection Kit, SPiDER-Β Gal

Cellulær senescens er et fænomen, hvorved normale celler holder op med at dele sig og går ind i en tilstand af irreversibel vækststop. Det er et af de mest fundamentale aspekter af cellulær adfærd og antages generelt at være forbundet med tumorundertrykkende mekanismer og en underliggende årsag til aldring. AlderdomsassocieretΒ -galactosidase (SA-Β -gal), som er overudtrykt i senescerende celler, er blevet brugt i vid udstrækning som en markør for cellulær alderdom. Selvom X-gal er et velkendt reagens, der bruges til at påvise SA-Β -gal, X-gal har følgende ulemper: 1) krav om fikserede celler på grund af dårlig cellepermeabilitet, 2) lav kvantitativ evne på grund af vanskeligheden ved visuelt at differentiere farvede vs. ikke-farvede celler 3) krav om lange farvningstider.

For at overvinde de ulemper, der er forbundet med at bruge X-gal, bruger vi et nyt reagens og en ny metode til påvisning af cellulær senescens. Edderkop-Β Gal tilbyder øget følsomhed til at detektere SA-Β -gal på grund af øget cellepermeabilitet og retention inde i celler. Sammenlignet med X-gal metoden FastCellular Senescence Detection Kit kan bruges til både levende og fikserede celler, fordi vi leverer Bafilomycin A1 til specifikt at hæmme endogene cellerΒ -galactosidaseaktivitet i levende celler og dermed øge detektionsspecificiteten for levende celler. For faste celler, SA-Β -gal kan detekteres ved at bruge SPiDER-Β Gal- og Mcllvaine-buffer (pH 6,0, se venligst protokollen for assays med faste celler). Siden SPiDER-Β Gal udsender stærk og stabil fluorescens efter reaktionen med SA-Β -gal, det kan anvendes til kvantitativ analyse ved flowcytometri. Derudover er farvningstiden kun 30 min. Sættet inkluderer en 6-brønds plade med 1 enhed SPiDER-Β Gal og 1 enhed Bafilomycin A1

Fordele ved at bruge FastCellular Senescence Detection Kit:

• Højere følsomhed på grund af en ny fluorogen detektionssonde
• Gælder for levende celler og fikserede væv
• Evne til at kvantificere SA-Β -gal i cellulær senescensanalyse
• Kort farvningstid (30 min)