Invitrogen™ DAPI og Hoechst Nukleinsyrepletter

FluoroPure™ -karakter af Hoechst og DAPI-pulvere fremstilles ved hjælp af stringente oprensningsprocesser for at minimere urenheder, der kan interferere med fluorescensbilleddannelse. Dette sikrer, at DAPI og Hoechst giver pålidelige og ensartede resultater med minimal baggrundsstøj. De> 98% renhed af FluoroPure Reagenser af kvalitet gør dem særligt velegnede til krævende applikationer såsom super-opløsningsmikroskopi og levende-celle-billeddannelse, hvor præcis og nøjagtig visualisering af DNA er afgørende.

DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole):

DAPI 4',6-diamidino-2-phenylindol er en blå fluorescerende probe, der fluorescerer klart ved selektiv binding til den mindre rille af dobbeltstrenget DNA, hvor dens fluorescens er ca. 20 gange større end i den ikke-bundne tilstand. Dens selektivitet for DNA og høj cellepermeabilitet muliggør effektiv farvning af kerner med lidt baggrund fra cytoplasmaet og effektiv kontrast i IHC-farvning og rumlig transkriptomik og proteomisk vævsbilleddannelse. DAPI er en klassisk nuklear modfarvning til immunfluorescensmikroskopi, såvel som en vigtig komponent i højindholdsscreeningsmetoder, der kræver cellebaseret kvantificering af DNA-indhold og segmentering (em/ex 341/452 nm).

DAPI som et dilactatpulver er mere vandopløseligt end dihydrochloridsaltet, og derfor et bedre valg til fremstilling af stamopløsninger i vand.

For at lave en 5 mg/ml DAPI-stamopløsning (14,3 mM til dihydrochloridet eller 10,9 mM til dilactatet), opløses indholdet af et hætteglas (10 mg) i 2 mL deioniseret vand (dH ₂ O) eller dimethylformamid (DMF). Det mindre vandopløselige DAPI-dihydrochlorid kan tage noget tid at opløses fuldstændigt i vand, og sonikering kan være nødvendig.

Bemærk: Ingen af disse DAPI-derivater er meget opløselige i PBS til stamopløsning.

Fortynd DAPI-stamopløsningen 1:5000 (eller 1:1000 for 1 mg/ml DAPI 62248) i ultrarent vand eller PBS (1μ g/ml DAPI). Filtrer arbejdsopløsningen for at fjerne farvestofaggregater, der kan resultere i et punkteret signal.

Hoechst 33342, Trihydrochlorid, Trihydrat og Hoechst 33258, Pentahydrat (bis-benzimid):

Vores Hoechst farvestoffer er kendte fluoroforer, der i vid udstrækning anvendes til DNA-farvning i både levende og fikserede celler. Med deres enestående affinitet og specificitet over for DNA fungerer disse farvestoffer som fremragende målretningsmidler, der kan konjugeres til forskellige molekyler, hvilket gør det muligt at binde dem til DNA.

De Hoechst farvestoffer omfatter typisk Hoechst 33258, Hoechst 33342, og Hoechst 34580. Udviklet af det tyske firma Hoechst AG i begyndelsen af 1970'erne har disse bisbenzimidfarvestoffer været meget brugt til DNA-farvning lige siden.

Ophidset af UV-lys, Hoechst farvestoffer udsender et bredt spektrum af blåt lys. Ved binding til DNA øges deres fluorescens ca. 30 gange, hvilket sikrer et stærkt signal-til-støj-forhold. Denne fluorescensforøgelse er resultatet af undertrykt rotationsrelaksation og hydreringsreduktion ved DNA-binding (em/ex 360/460 nm).

Hoechst farvestoffer er ikke-interkalerende og binder specifikt til den mindre rille af DNA i A –T-rige regioner. Denne unikke bindingsmekanisme giver mulighed for præcis og pålidelig DNA-farvning.

Uanset om du arbejder med levende eller faste celler, vores Hoechst farvestoffer er kompatible med immunhistokemi-applikationer. Derudover indbinding af Hoechst 33342 til DNA inducerer minimal cytotoksicitet, hvilket sikrer levedygtigheden af dine celler.

Mens alle tre Hoechst farvestoffer har lignende anvendelser, de har små forskelle i deres egenskaber. Hoechst 33342 er for eksempel væsentligt mere cellegennemtrængelig på grund af tilføjelsen af en lipofil ethylgruppe, hvilket gør den til det foretrukne valg til farvning af levende celler. På den anden side, Hoechst 34580, med sin dimethylamingruppe i stedet for phenolen, udviser et forskudt emissionsmaksimum ved 490 nm sammenlignet med de 461 nm af Hoechst 33258 og Hoechst 33342.

Hoechst 33258, Pentahydrat er også kendt som bis-benzimid.

Anvendelse af DAPI og Hoechst Fluorescerende farvestoffer:

• DNA-farvning, —der almindeligvis anvendes til DNA-farvning i fluorescensmikroskopi og flowcytometri. Det binder til den mindre rille af dobbeltstrenget DNA og udsender blå fluorescens, når det exciteres af ultraviolet (UV) lys. Dette giver forskere mulighed for at visualisere og kvantificere DNA i celler, væv og kerner.
• Cellecyklusanalyse er —meget brugt til at analysere cellecyklussen. Ved at farve celler med dette farvestof og bruge flowcytometri eller fluorescensmikroskopi kan forskere identificere og kvantificere forskellige faser af cellecyklussen, såsom G1-, S- og G2/M-faser. Denne analyse giver indsigt i celleproliferation, cellecyklusprogression og cellecyklusabnormiteter.
• Nuklear morfologi og kromatinorganisation —studerer nuklear morfologi og kromatinorganisation. Ved at visualisere DNA'et i kernen kan forskere undersøge ændringer i nuklear størrelse, form og kromatinkondensering, som er forbundet med forskellige cellulære processer og forhold.