Invitrogen™ DAPI og Hoechst Nukleinsyrepletter

FluoroPure-kvalitet™ og DAPI-pulvere fremstilles ved hjælp af Hoechst strenge rensningsprocesser for at minimere urenheder, der kan forstyrre fluorescensbilleddannelse. Dette sikrer, at DAPI Hoechst leverer pålidelige og konsistente resultater med minimal baggrundsstøj. De >98% renhed af FluoroPure kvalitetsreagenser gør dem særligt velegnede til krævende anvendelser som superopløsningsmikroskopi og levende celle-billeddannelse, hvor præcis og præcis visualisering af DNA er afgørende.

DAPI (4', 6-Diamidino-2-Phenylindol):

DAPI 4',6-diamidino-2-phenylindol er en blå fluorescerende probe, der fluorescerer kraftigt, når den selektivt binder til den mindre fure i dobbeltstrenget DNA, hvor dens fluorescens er cirka 20 gange større end i den ikke-bundne tilstand. Dens selektivitet for DNA og høje cellepermeabilitet muliggør effektiv farvning af kerner med lidt baggrund fra cytoplasmaet og effektiv kontrastering i IHC-farvning samt rumlig transkriptomik og proteomisk vævsbilleddannelse. DAPI er en klassisk nuklear modfarvning til immunofluorescensmikroskopi samt en vigtig komponent i højindholdsscreeningsmetoder, der kræver cellebaseret kvantificering af DNA-indhold og segmentering (f.eks. 341/452 nm).

DAPI som dilaktatpulver er mere vandopløseligt end dihydrochloridsaltet og derfor et bedre valg til at forberede fondopløsninger i vand.

For at lave en 5 mg/ml DAPI-fondopløsning (14,3 mM for dihydrochlorid eller 10,9 mM for dilactat), opløs indholdet af en flaske (10 mg) i 2 ml deioniseret vand (dH₂O) eller dimethylformamid (DMF). Den mindre vandopløselige DAPI-dihydrochlorid kan tage noget tid at opløse sig helt i vand, og sonikering kan være nødvendig.

Bemærk: Ingen af disse DAPI-derivater er særligt opløselige i PBS for Stock Solution.

Fortynd DAPI-standardopløsningen 1:5000 (eller 1:1000 for 1 mg/ml DAPI 62248) i ultrarent vand eller PBS (1 μg/ml DAPI). Filtrer den fungerende opløsning for at fjerne farvestofaggregater, der kan resultere i punktationssignal.

Hoechst 33342, trihydrochlorid, trihydrat og Hoechst 33258, pentahydrat (bis-benzimid):

Vores Hoechst farvestoffer er berømte fluoroforer, der i vid udstrækning bruges til DNA-farvning i både levende og fikserede celler. Med deres enestående affinitet og specificitet over for DNA fungerer disse farvestoffer som fremragende målretningsmidler, der kan bøjes til forskellige molekyler, hvilket gør det muligt at binde dem til DNA.

Farverne Hoechst omfatter Hoechst typisk 33258, Hoechst 33342 og Hoechst 34580. Udviklet af det tyske firma Hoechst AG i begyndelsen af 1970'erne, har disse bisbenzimidfarvestoffer siden da været bredt anvendt til DNA-farvning.

Farvestoffer, der ophidses af UV-lys, Hoechst udsender et bredt spektrum af blåt lys. Ved binding til DNA øges deres fluorescens cirka 30 gange, hvilket sikrer et stærkt signal-til-støj-forhold. Denne fluorescensforstærkning er resultatet af undertrykt rotationsafslapning og hydreringsreduktion ved DNA-binding (f.eks. 360/460 nm).

Hoechst farvestoffer er ikke-interkalerende og binder specifikt til den mindre rille i DNA ved A-T-rige –områder. Denne unikke bindingsmekanisme muliggør præcis og pålidelig DNA-farvning.

Uanset om du arbejder med levende eller fikserede celler, er vores Hoechst farvestoffer kompatible med immunohistokemiske anvendelser. Derudover inducerer bindingen af Hoechst 33342 til DNA minimal cytotoksicitet, hvilket sikrer dine cellers levedygtighed.

Selvom alle tre Hoechst farvestoffer har lignende anvendelser, har de små forskelle i deres egenskaber. Hoechst 33342 er for eksempel betydeligt mere cellepermeabel på grund af tilsætningen af en lipofil ethylgruppe, hvilket gør den til det foretrukne valg til levende cellefarvning. På den anden side Hoechst udviser 34580, med sin dimethylamingruppe i stedet for phenolen, et forskudt emissionsmaksimum ved 490 nm, sammenlignet med 461 nm for Hoechst 33258 og Hoechst 33342.

Hoechst 33258, Pentahydrat er også kendt som bis-Benzimid.

Anvendelse af DAPI og Hoechst fluorescerende farvestoffer:

• DNA-farvning, —som almindeligvis anvendes til DNA-farvning i fluorescensmikroskopi og flowcytometri. Den binder sig til den mindre rille i dobbeltstrenget DNA og udsender blå fluorescens, når den exciteres af ultraviolet (UV) lys. Dette gør det muligt for forskere at visualisere og kvantificere DNA i celler, væv og kerner.
• Cellecyklusanalyse anvendes—bredt til at analysere cellecyklussen. Ved at farve celler med dette farvestof og bruge flowcytometri eller fluorescensmikroskopi kan forskere identificere og kvantificere forskellige faser af cellecyklussen, såsom G1-, S- og G2/M-faserne. Denne analyse giver indsigt i celleproliferation, cellecyklusprogression og cellecyklusabnormiteter.
• Nuklear morfologi og kromatinorganisation studerer—nuklear morfologi og kromatinorganisation. Ved at visualisere DNA'et i kernen kan forskere undersøge ændringer i kernestørrelse, form og kromatinkondensation, som er forbundet med forskellige cellulære processer og forhold.