Invitrogen™ CyQUANT™ LDH Cytotoksicitetsanalyse, fluorescens

Lactatdehydrogenase (LDH) er et cytosolisk enzym, der findes i mange forskellige celletyper, og som frigives til cellekulturmediet ved beskadigelse af plasmamembranen. De CyQUANT LDH Cytotoxicity Assay, fluorescens, giver reagenserne til nøjagtigt og kvantitativt at måle denne ekstracellulære LDH.

De CyQUANT LDH Cytotoxicity Assay, fluorescens, funktioner omfatter:
• Praktisk —add-mix-read assayprotokol til adhærente og suspensionsceller, inklusive 3D-cellemodeller
•Præcis giver —en kvantitativ måling af LDH-frigivelse
•Fleksibel —ideel til high-throughput screening, overvåg cytotoksicitet fra den samme prøve over tid
•Robust —formulering med højt oprenset resazurin resulterer i et stort analysedynamikområde. LDH

er et cytosolisk enzym, der findes i mange forskellige celletyper og er en veletableret og pålidelig indikator for cellulær toksicitet. Beskadigelse af plasmamembranen resulterer i en frigivelse af LDH til det omgivende cellekulturmedium. Denne ekstracellulære LDH kan kvantificeres ved en koblet enzymatisk reaktion, hvor LDH katalyserer omdannelsen af laktat til pyruvat via NAD+-reduktion til NADH. Diaphorase bruger derefter NADH til at reducere resazurin til resorufin, der kan påvises ved hjælp af en excitation på 560 nm og emission på 590 nm. Niveauet af resorufindannelse er direkte proportionalt med mængden af LDH frigivet til mediet.

Som en konsekvens af syntese- og fremstillingsprocesserne indeholder alle resazurin-baserede reagenser en påviselig mængde resorufin-kontamination. Mængden af kontaminering kan variere meget mellem kilden til materialet og fremstillingsbetingelserne, hvilket bidrager til forskelle i detekterbar baggrundsfluorescens. Endnu vigtigere er det, at det kontaminerende resorufin reducerer signal-til-baggrundsforholdet og analysens dynamiske område. Der blev udviklet en innovativ proces, der fjerner det forurenende resorufin, hvilket resulterer i det meget rene resazurin, der anvendes i CyQUANT™ LDH Cytotoksicitetsanalyse, fluorescens.

De CyQUANT LDH Cytotoxicity Assay, fluorescens, giver de reagenser, der er nødvendige for den enkle, pålidelige fluorescens-baserede kvantificering af cellulær cytotoksicitet. Sættet kan bruges med forskellige celletyper, herunder 3D-cellemodeller, til at måle cytotoksicitet medieret af kemiske forbindelser samt cellemedieret cytotoksicitet. Da LDH i mediet er indikatoren for cellulær cytotoksicitet, kan assayet bruges til at overvåge cytotoksicitet fra den samme prøve over tid. For at udføre assayet overføres en alikvot af cellekulturmediet til en ny plade, og reaktionsblandingen tilsættes. Efter 10 minutters inkubation stoppes reaktionen ved at tilsætte stopopløsning, og fluorescens måles ved hjælp af en mikropladelæser.