Thermo Scientific™ CloneJET™ PCR Kloning Kit med DH10B Kompetente celler

• Denne pakke inkluderer CloneJET PCR-kloningskit (20 eller 40 reaktioner) og DH10B Kompetente celler, der er optimeret til brug med sættet og kan transformeres direkte med ligeringsproduktet

CloneJET PCR-kloningskit
Et avanceret positivt udvælgelsessystem til højeffektiv kloning af PCR-produkter genereret med enhver termostabil DNA-polymerase. Ethvert stumpt eller klæbende DNA-fragment kan klones. Sættet fungerer godt med både phosphorylerede og ikke-phosphorylerede DNA-fragmenter. Ligering ind i den inkluderede positive selektionsvektor tager kun fem minutter, hvilket giver mere end 99 % rekombinante kloner. Blunt-endede PCR-produkter genereret med et korrekturlæsningsenzym ligeres direkte ind i kloningsvektoren.

PCR-produkter, der er genereret enten med ikke-korrekturlæsende DNA-polymeraser eller blandinger af DNA-polymeraser, skal gøres stumpe før ligering i en fem minutters reaktion med det termostabile DNA Blunting Enzyme, der følger med sættet. DH10B Kompetente celler er optimeret til brug med dette kit og kan transformeres direkte med ligeringsproduktet.

Indeholder den nye, brugsklare positive selektionskloningsvektor pJET1.2/stump. Vektoren indeholder et letalt restriktionsenzymgen, der afbrydes ved ligering af et DNA-insert i kloningsstedet. Som et resultat er kun bakterieceller med rekombinante plasmider i stand til at danne kolonier. Re-cirkulariserede pJET1.2/stumpe vektormolekyler, der mangler et insert, udtrykker et letalt restriktionsenzym, som dræber værts-E. coli-cellen efter transformation. Denne positive selektion accelererer drastisk processen med koloniscreening og eliminerer yderligere omkostninger, der kræves til blå/hvid selektion.

• Hurtig - PCR-kloning på kun fem minutter
• Højeste effektivitet - 99% af positive kloner
• Ingen kloningsbaggrund - positiv selektionsvektor
• Alsidig - ideel til stump-ende eller sticky-end kloning
• Økonomisk - ingen dyr blå/hvid afskærmning

Ansøgninger omfatter:

• Kloning af stumpende eller 3' dA-halede PCR-produkter op til 10 kb
• Kloning af DNA-fragmenter genereret af restriktionsenzymer
• Sekventering af klonet DNA
• in vitro og in vivo transkription af klonede inserts fra T7-promotoren

DH10B Kompetente celler
Højeffektive, kemisk kompetente E.coli-celler. De DH10B stamme er egnet til kloning af DNA indeholdende methylcytosin og methyladenin, hvilket tillader både prokaryot og eukaryotisk genomisk DNA at blive klonet effektivt. Disse celler er ideelle til konstruktion af cDNA-biblioteker under anvendelse af plasmid-afledte vektorer. Genotype: F– mcrAΔ (mrr-hsdRMS-mcrBC)φ 80lacZ ΔM15Δ lacX74 recA1 endA1 araD139Δ (ara-leu)7697 galU galKλ– rpsL(StrR) nupG.

• Høj transformationseffektivitet:> 1x109 cfu/μ g pUC19 DNA
• Velegnet til rutine- og kloningsapplikationer med høj kapacitet
• Praktisk to reaktioner pr. hætteglasemballage
• SOC Udvækstmedium medfølger