Invitrogen™ Click-iT™ TUNEL Alexa Fluor Imaging assays til mikroskopi& HCS

Apoptose er præget af definerede cellulære processer, herunder celleafrunding, blebbing og DNA-fragmentering. TUNEL-assayet er den mest udbredte analytiske metode til at påvise fragmenteret DNA i apoptotiske celler i vævsprøver, begyndende med inkorporering af modificerede dUTP'er ved 3'-OH-enderne af fragmenteret DNA. dUTP'erne inkluderer ofte et fluorofor-molekyle. På grund af størrelsen af fluoroforen kan modificerede dUTP'er vise lavere end forventet inkorporeringshastigheder, hvilket negativt påvirker følsomheden af TUNEL-analysen. Ganske ofte udviser fluoroforer, der anvendes i aktuelt tilgængelige TUNEL-assay-kits, fotoblegning og fluorescerende spektrale overlapningsproblemer, som begge reducerer følsomheden af og evnen til at multiplekse disse assays.

De Click-iT Plus TUNEL-analysen blev udviklet til at løse disse problemer og er baseret på en kobber(I)-katalyseret (dvs. klik) reaktion mellem et azid og alkyn. Den lille størrelse af Alexa Fluor azid, som har en molekylvægt på ca. 1 kDa, muliggør lettere inkorporering af Alexa Fluor 488, 594 eller 647 farvestof til komplekse prøver sammenlignet med større (MW∼ 100.000 Da) antistoffer. Dette tillader mild fiksering eller permeabilisering og hurtigere analysegennemløbstid (ca. to timer) og muliggør påvisning af en højere procentdel af apoptotiske celler under identiske forhold. På grund af dets blide reaktionsforhold, Click-iT Plus TUNEL-assay kan også multiplekses med fluorescerende proteiner eller farvestoffer.

De Click-iT TUNEL Alexa Fluor billeddannelsesassays indeholder alle komponenter, der er nødvendige for nøjagtigt og pålideligt at detektere apoptose i adhærente celler dyrket på dækglas eller 96-brønds mikroplader, og de inkluderer også DNase I til at generere strengbrud til den positive kontrol.