Thermo Scientific™ CellSensor™ irf1- bla Ba/F3 Cellelinje

Jak/Stat signalveje spiller væsentlige roller i de cellulære responser på forskellige cytokiner. En af Jak/Stat-vejene, Jak2/Stat5, medierer celleproliferation som reaktion på Interleukin-3 (IL-3), prolactin, erythropoietin (Epo) og granulocyt - makrofagkolonistimulerende faktor (GM-CSF). JAK2-gen-knockout forårsager embryonal dødelighed på grund af defekt erytropoiese, hvilket tyder på, at Jak2/Stat5-vejen spiller en vigtig rolle i dannelsen af røde blodlegemer. Den nylige opdagelse af en aktiverende mutation i JAK2 (V617F) til stede i en høj procentdel af myeloproliferative sygdomspatienter (MPD) tyder på, at Jak2/Stat5-vejen kan være et potentielt terapeutisk mål for visse former for MPD. Den aktiverede Stat5-transkriptionsfaktor genkender og binder sig til en specifik palindromisk DNA-sekvens fundet i promotorregionen afβ -kasein, interferon regulatorisk faktor-1 (irf-1) og en række andre gener.

De CellSensor™ irf1-bla BA/F3-cellelinje indeholder et beta-lactamase-reportergen under kontrol af irf-1-responselementet stabilt integreret i BA/F3-celler. Denne cellelinje er valideret for EC50 og Z'-faktor under optimerede betingelser ved anvendelse af muse-IL-3 (mIL-3). Denne cellelinje er også blevet testet under variable eksperimentelle betingelser, herunder DMSO-koncentration, celleantal, stimulationstid og substratladningstid. Reaktionsevne over for Jak Inhibitor 1, en lille molekyle inhibitor, blev også testet. CellSensor™ irf1-bla BA/F3-celler blev behandlet med mIL-3 i tre eksemplarer over det angivne koncentrationsområde i et 384-brønds format. Celler blev inkuberet i 5 timer. med mIL-3 agonist i 0,5 % DMSO og derefter kombineret med LiveBLAzer™ -FRET B/G-substrat (CCF4-AM) i 2,5 timer. Fluorescensemissionsværdier ved 460 nm og 530 nm blev opnået ved anvendelse af en standard fluorescenspladelæser. Responsforholdet for hvert replikat blev plottet mod de angivne koncentrationer af mIL-3. CellSensor™ irf1-bla BA/F3-celler blev behandlet med Jak Inhibitor 1 i 30 minutter over det angivne koncentrationsområde i et 384-brønds format. Celler blev derefter inkuberet med mIL-3 agonist i 0,5 % DMSO i 5 timer. og derefter kombineret med LiveBLAzer™ - FRET B/G-substrat (CCF4-AM) i 2,5 timer. Fluorescensemissionsværdier ved 460 nm og 530 nm blev opnået ved anvendelse af en standard fluorescenspladelæser. Emissionsforholdene blev plottet mod de angivne koncentrationer af Jak Inhibitor 1. Akademiske og non-profit kunder, spørg venligst for særlige priser.