Thermo Scientific™ CellSensor™ AP-1- bla A375 cellelinje

De CellSensor™ AP1-bla A375-cellelinje indeholder et beta-lactamase-reportergen under kontrol af AP1-responselementet stabilt integreret i A375-celler. A375-celler er humane melanomkræftceller, der indeholder den endogene B-Raf-mutation V600E, hvilket resulterer i konstitutiv B-Raf-kinaseaktivitet. De CellSensor™ AP1-bla A375 cellelinje er en klonal population isoleret ved flowcytometri baseret på konstitutiv ekspression af beta-lactamase.

Denne cellelinje er blevet valideret med forskellige små-molekyle Raf-hæmmere såvel som B-Raf Stealth RNAi™ siRNA. Denne cellelinje er også blevet testet for assay-ydeevne under variable forhold, herunder DMSO-koncentration, celleantal, inkubationstid for forbindelsen og substratladningstid og valideret for Zfi-faktor og IC50-koncentrationer af Raf1 Inhibitor I. RAF-genfamilien (RAF1, A-RAF og B-RAF) koder for nært beslægtede serin/threonin-proteinkinaser, som er vigtige effektorer af Ras-aktivering. Raf1 og A-Raf er sjældent muterede, hvorimod mutationer i B-Raf er almindelige i humane kræftformer, især melanom. B-Raf er muteret i omkring 70 % af humane melanomer, 35-70 % af papillære thyroideacarcinomer og mindre almindeligt i lunge- og kolorektale carcinomer. Mutationer er for det meste i B-Raf-kinasedomænet, og i melanomer er langt de fleste V600E-missense-mutationer, der fører til aktivering af B-Raf-kinase. Den konstitutive aktivitet af B-Raf V600E kan direkte føre til aktivering af Mek/MAPK-signalvejen. Derfor kunne inhibering af B-Raf/Mek/MAPK-signalering være en potentiel måde at behandle melanomer og andre tumorer med mutant B-Raf på.