Invitrogen™ CellEvent™ Senescence Green Detection Kit

Denne fluorescein-baserede probe indeholder to galactosiddele, hvilket gør den til et mål forβ -galactosidase. Aktivering afβ -galactosidase bruges almindeligvis som en biomarkør for ældende celler. Dette hydrolaseenzym findes i lysosomer og omdannesβ -galactosider til monosaccharider under sure pH-forhold. Det enzymatisk spaltede produkt tilbageholdes i cellen på grund af kovalent binding af intracellulære proteiner og udsender et fluorogent signal, der har absorptions-/emissionsmaksima på 490/514 nm.

Sættets funktioner inkluderer:
•Pålidelig og hurtig fluorescerende detektion af senescerende celler
• Større følsomhed end traditionel kolorimetrisk x-gal
• Fluorescerende signal bevares godt og detekteres ved brug af standard Alexa Fluor™ 488/FITC filtersæt
• Multiplex-—aktiveret fluorescerende senescensprobe kan multiplekses

På grund af en begrænset replikativ levetid går normale celler i cellecyklusstandsning, også kendt som cellulær senescens. Mens i denne senescent fase, forbliver cellerne metabolisk aktive uden at gennemgå celledød eller deling. De vedtager en specifik fænotypik, der inkluderer udseendet af multiple kerner, øget vakuolisering, ekspression af pH-afhængigβ -galactosidase og morfologisk forstørrelse og forlængelse. Ældrelse kan gennem en række forskellige mekanismer spille en rolle i tumorundertrykkelse, tumorprogression, aldring og vævsreparation.

Aktivering afβ -galactosidase bruges almindeligvis som en biomarkør for ældende celler. Dette hydrolaseenzym findes i lysosomer og omdannesβ -galactosider til monosaccharider under sure pH-forhold. Aktiviteten er optimal ved lysosomal pH 4, men konventionelle assays måler ved pH 6. Det har vist sig, at normaliseretβ -galactosidase-aktivitet er dobbelt så høj i ældende celler som i præ-ældende celler uanset den pH-værdi, der anvendes til testning.

Et kolorimetrisk substrat tilβ -galactosidase, 5-brom-4-chlor-3-indolyl-β -D-galactopyranosid (x-gal), har længe været brugt til at påvise metabolisk aktivitet i celler in vitro. Dets anvendelse er dog begrænset på grund af inkonsekvent signal, længde af assay og manglende evne til multipleks.

Derfor har vi udviklet et følsomt, fluorescerende substrat tilβ -galactosidase, der kan bruges til påvisning af senescerende celler. De CellEvent™ Senescence Green probe er et fluorescein-baseret reagens, der indeholder to galactosiddele, hvilket gør det til et specifikt mål forβ -galactosidase. Det enzymspaltede produkt tilbageholdes i cellen på grund af kovalent binding af intracellulære proteiner og udsender et fluorogent signal, der har absorptions-/emissionsmaksima på 490/514 nm.

De CellEvent™ Senescent Green Kit giver CellEvent™ Senescent Green probe og en optimeret buffer til påvisning af senescerende celler i fikserede prøver. Denne probe kan multiplekses med andre fluorescerende reagenser, der er kompatible med paraformaldehydfiksering.