Invitrogen™ CellEvent™ Caspase-3/7 detektionsreagenser

Funktioner af disse indikatorer omfatter:
• Optimeret caspase-3/7 substrat til apoptoseanalyse
• Let at —bruge tilføje og læse; ingen cellelyse nødvendig
• Bruges til tidsforløbsmålinger; nemt vælge tidspunktet af interesse
• Kompatibel med både levende celle fluorescens-billeddannelse og formaldehyd-baserede fikseringsmetoder
• Multiplex aktiveret kombineres med —andre fluorescerende reagenser for at bekræfte apoptose i den samme celle eller cellepopulation

CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent : Absorptions-/emissionsmaksima for∼ 502/530 nm. Detekterbar med FITC/GFP traditionelt filtersæt.

CellEvent™ Caspase-3/7 rød detektionsreagens : Absorptions-/emissionsmaksima på∼ 590/610 nm. Detekterbar med traditionelt Texas rød filtersæt.

CellEvent™ Caspase-3/7 rød detektionsreagens og CellEvent™ Caspase-3/7 Green leveres som tørpulver. Tilsæt blot 100 μL PBS for at tørre pulveret ned for at generere 100X stamopløsning. Fortynd denne 100X stamopløsning 1:100 i komplette medier og farve celler i 30-60 minutter og analyser med fluorescensmikroskop.

CellEvent™ Caspase-3/7 Red Detection Reagent leveres også som allerede forberedt DMSO-opløsning. DMSO-opløsningen er 400X stamopløsning, som er klar til brug. Bare fortynd i vækstmedier 1:400 og farv cellerne i 30 til 60 minutter.

For at forhindre, at de apoptotiske celler skylles væk, er det ikke nødvendigt at vaske dem efter endt stilstand. Farvede celler kan analyseres levende, eller kan fikseres med 4% Paraformaldehyd opløsning som f.eks. Image-IT™ Paraformaldehyd 4% i 0,1M fosfatbuffer pH 7,4, kat. Ingen. I28800. Disse faste celler kan behandles yderligere til ICC-arbejdsgang.

Substratspecifikationer
CellEvent Caspase-3/7-detektionsreagenser er et fire-aminosyre-peptid (DEVD) konjugeret til et nukleinsyrebindende farvestof. DEVD-peptidsekvensen er et spaltningssted for caspase-3/7, og det konjugerede farvestof er ikke-fluorescerende, indtil det spaltes fra peptidet og bindes til DNA.

Handlingsprincipper
CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent er i sig selv ikke-fluorescerende, da DEVD-peptidet hæmmer farvestoffets evne til at binde til DNA. Efter aktivering af caspase-3/7 i apoptotiske celler spaltes DEVD-peptidet, hvilket gør det muligt for farvestoffet at binde til DNA og producere en lys, fluorogen reaktion.

Enkel tre-trins protokol
at bruge CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent, tilføj det blot til cellerne, inkuber 30 –60 minutter og visualiser. Apoptotiske celler med aktiveret caspase-3/7 vil have lyse grønne eller røde kerner, mens celler uden aktiveret caspase 3/7 vil have minimalt fluorescerende signal.

Assays alsidighed muliggør påvisning og fiksering af levende celler.
Denne robuste analyse muliggør undersøgelse af caspase-3/7-aktivering i levende celler. Da vasketrin ikke er nødvendige for påvisning, bevares skrøbelige apoptotiske celler, der typisk går tabt under vasketrin. Vigtigt er det fluorescerende signal fra CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent kan overleve fiksering og permeabilisering. Dette giver mulighed for fleksibilitet til at udføre slutpunktsassays og probe for andre proteiner af interesse ved hjælp af immuncytokemi.