Invitrogen™ CellEvent™ Caspase-3/7 detektionsreagenser

Kendetegn ved disse indikatorer omfatter:

• Optimeret caspase-3/7 substrat til apoptoseanalyse
• Let at bruge, —tilføj og læs; ingen cellevask eller lysis kræves
• Brug til tidskursmåling; vælg nemt det interessante tidspunkt op til og ud over 72 timer
• Kompatibel med både levende cellefluorescensbilleddannelse og formaldehydbaserede fikseringsmetoder
• Multiplex-aktiveret—kombineres med andre fluorescerende reagenser for at bekræfte apoptose i samme celle eller cellepopulation

CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagens: Absorptions-/emissionsmaksimum på ∼502/530 nm. Detekterbar med FITC/GFP traditionelt filtersæt.

CellEvent™ Caspase-3/7 Rød Detektionsreagens: Absorptions-/emissionsmaksimum på ∼590/610 nm. Kan detekteres med traditionelt Texas rødt filtersæt.

CellEvent™ Caspase-3/7 rød detektionsreagens og CellEvent™ Caspase-3/7 Green leveres som tørpulver. Tilsæt blot 100 μl PBS for at tørre pulveret og danne 100X lageropløsning. Fortynd denne 100X lageropløsning 1:100 i komplet medie og farvning i celler i 30 til 60 minutter og analyser med fluorescensmikroskop.

CellEvent™ Caspase-3/7 Green Detection Reagent leveres også som en allerede forberedt DMSO-løsning. DMSO-opløsningen er en 400X standardopløsning, som er klar til brug. Bare fortynd i vækstmediet 1:400 og farv cellerne i 30 til 60 minutter.

For at forhindre, at de apoptotiske celler skylles væk, er der ikke behov for vask ved farvningens afslutning. Farvede celler kan analyseres levende eller fikseres med 4% paraformaldehydopløsning såsom Image-IT™ Paraformaldehyd 4% i 0,1M Phosphate Buffer pH 7,4, Kat. Nr. I28800. Disse faste celler kan yderligere behandles ved hjælp af fastcellekompatible farvestoffer eller ICC-workflows.

Substratspecifikke forhold

CellEvent Caspase-3/7 detektionsreagenser er et fire-aminosyre peptid (DEVD), der er konjugeret til et nukleinsyrebindende farvestof. DEVD-peptidsekvensen er et kløvningssted for caspase-3/7, og det konjugerede farvestof er ikke-fluorescerende, indtil det kløves fra peptidet og bindes til DNA.

Virkningsprincipper

CellEvent Caspase-3/7 Green Detection Reagent er intrinsisk ikke-fluorescerende, da DEVD-peptidet hæmmer farvestoffets evne til at binde til DNA. Efter aktivering af caspase-3/7 i apoptotiske celler spaltes DEVD-peptidet, hvilket gør det muligt for farvestoffet at binde til DNA og producere en lys, fluorogenisk respons.

Simpel tretrinsprotokol

For at bruge CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagens skal du blot tilsætte det til celler, inkubere i 30 til 60 minutter og visualisere over tid. Apoptotiske celler med aktiveret caspase-3/7 vil have klare grønne eller røde kerner, mens celler uden aktiveret caspase 3/7 vil have minimalt fluorescerende signal.

Assay-alsidighed muliggør detektion og fiksering af levende celler

Denne robuste assay muliggør undersøgelse af caspase-3/7-aktivering i levende celler. Desuden, da vasketrin ikke er nødvendige for detektion, bevares skrøbelige apoptotiske celler, der typisk går tabt under vasketrin. Vigtigt er det, at det fluorescerende signal fra CellEvent Caspase 3/7 Detection Reagent kan overleve fiksering og permeabilisering. Dette giver fleksibilitet til at udføre endepunkt-analyser og probe efter andre proteiner af interesse ved hjælp af reportere, farvestoffer eller immunocytokemi.