Invitrogen™ BODIPY™ 630/650-X NHS Ester (Succinimidyl Ester)

BODIPY™ 630/650-X farvestof er lyst, langt rødt fluorescerende farvestof. Det har en høj ekstinktionskoefficient og fluorescenskvanteudbytte og er relativt ufølsom over for opløsningsmiddelpolaritet og pH-ændring. I modsætning til de meget vandopløselige fluoroforer Alexa Fluor™ 488 farvestof og fluorescein (FITC), BODIPY™ farvestoffer har unikke hydrofobe egenskaber, der er ideelle til farvning af lipider, membraner og andre lipofile forbindelser. BODIPY™ 630/650-X farvestof har en relativt lang levetid i exciteret tilstand (typisk 5 nanosekunder eller længere), hvilket er nyttigt til fluorescenspolarisationsbaserede assays og et stort to-foton-tværsnit til multifoton-excitation. Ud over reaktive farveformuleringer tilbyder vi BODIPY™ 630/650-X farvestof konjugeret til en række antistoffer, peptider, proteiner, sporstoffer og amplifikationssubstrater optimeret til cellulær mærkning og detektion.

NHS-esteren (eller succinimidylesteren) af BODIPY™ 630/650-X er det mest populære værktøj til at konjugere farvestoffet til et protein eller antistof. NHS-estere kan anvendes til at mærke de primære aminer (R- _NH2 ) af proteiner, aminmodificerede oligonukleotider og andre aminholdige molekyler. Det resulterende BODIPY™ 630/650-X-konjugater udviser lys fluorescens, smalle emissionsbåndbredder og relativt lange levetider i exciteret tilstand, hvilket kan være nyttigt til fluorescenspolarisationsassays og to-foton excitation (TPE) mikroskopi.

Dette reaktive farvestof indeholder en syv-atom aminohexanoyl ('X') spacer mellem fluoroforen og NHS-estergruppen. Denne spacer hjælper med at adskille fluoroforen fra dens fastgørelsespunkt, hvilket potentielt reducerer interaktionen af fluoroforen med biomolekylet, som den er konjugeret til.

Detaljeret information om dette BODIPY™ 630/650-X NHS ester:

Fluorofor etiket: BODIPY™ 630/650-X farvestof
Reaktiv gruppe: NHS-ester (succinimidylester)
Reaktivitet: Primære aminer på proteiner og ligander, aminmodificerede oligonukleotider
Ex/Em af konjugatet: 625/640 nm
Ekstinktionskoefficient: 101.000 cm-1M-1
Molekylvægt: 660,5

Typisk konjugationsreaktion
Amin-reaktive reagenser kan konjugeres med praktisk talt ethvert protein eller peptid; den medfølgende protokol er optimeret til IgG-antistoffer. Reaktionen kan skaleres for enhver mængde protein, men koncentrationen af proteinet bør være mindst 2 mg/ml for at opnå optimale resultater. Vi anbefaler at prøve tre forskellige grader af mærkning ved at bruge tre forskellige molære forhold mellem det reaktive reagens og protein.

De BODIPY™ NHS-ester opløses typisk i vandfrit dimethylformamid af høj kvalitet (DMF) eller dimethylsulfoxid (DMSO), og reaktionen udføres i 0,1-0,2 M natriumbicarbonatbuffer, pH 8,3, ved stuetemperatur i 1 time. Fordi pKa af den terminale amin er lavere end for lysinepsilon-aminogruppen, kan du opnå mere selektiv mærkning af aminterminalen ved at bruge en buffer tættere på neutral pH.

Konjugatrensning
Mærkede antistoffer er typisk adskilt fra frie BODIPY™ farve ved hjælp af en gelfiltreringskolonne, som f.eks Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller tilsvarende. For meget større eller mindre proteiner, vælg et gelfiltreringsmedium med en passende molekylvægtsgrænse eller oprens ved dialyse. Vi tilbyder flere oprensningssæt optimeret til forskellige mængder antistofkonjugat:
Antistofkonjugatoprensningskit til 0,5-1 mg (A33086)
Antistofkonjugatoprensningskit til 20-50μ g (A33087)
Antistofkonjugatoprensningskit til 50-100μ g (A33088)

Lær mere om protein- og antistofmærkning
Vi tilbyder et bredt udvalg af Molecular Probes™ antistof- og proteinmærkningssæt, der passer til dit udgangsmateriale og din eksperimentelle opsætning. Se vores antistofmærkningssæt eller brug vores værktøj til valg af mærkningskemi for andre valg. For at lære mere om vores mærkningssæt, læs sæt til mærkning af proteiner og nukleinsyrer —afsnit 1.2 i Molecular Probes™ Håndbog.

Vi ’laver et skræddersyet konjugat til dig
Hvis du ’ikke kan finde det, ’du leder efter, i vores onlinekatalog, vil vi ’forberede et tilpasset antistof eller proteinkonjugat til dig. Vores tilpassede konjugationsservice er effektiv og fortrolig, og vi står ved kvaliteten af vores arbejde. Det er vi ISO 13485:2000 certificeret.