Invitrogen™ BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral Pol II miR RNAi-ekspressionssystem med EmGFP

De BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi-ekspressionsvektorsæt kombinerer fordelene ved traditionelle RNAi-vektorer (stabil ekspression og evnen til at bruge viral levering) med muligheder for vævsspecifik ekspression og multiple target-knockdown fra det samme transkript. De BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kits og BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi-ekspressionssystemer er designet til at udtrykke kunstige miRNA'er, som er konstrueret til at have 100 % homologi med din målsekvens og vil resultere i målspaltning. Brug ’af Invitrogens prisvindende BLOCK-iT™ RNAi Designer, over 70% af konstruktionerne producerer mere end 70% knockdown. De Invitrogen Pol II ekspressionsfamilie af vektorer omfatter:

– Stærk udtryk fra CMV umiddelbart tidlige promotor, med mulighed for at bruge EF-1α vævsspecifikke promotorer eller andre promotorer via MultiSite Gateway™ rekombination.
– Kompatibilitet med mange af ’Invitrogen s Gateway™ destination (DEST) vektorer til genekspression.

– Evne til at kontrollere initieringen af RNAi-responset med en ny BLOCK-iT™ Inducerbart Pol II miR RNAi Expression Vector Kit m/EmGFP (kat. nr. K493900).
– En ny destinationsvektor i BLOCK-iT™HiPerform™ Lentiviralt PolII miR RNAi-ekspressionssystem med EmGFP. Den nye vektor indeholder en mRNA-stabiliserende sekvens (WPRE) og en nuklear importsekvens (cPPT), som genererer op til 5 gange højere virustitre og EmGFP-ekspressionsniveauer. Derudover udtrykkes blasticidinresistens fra muse-PGK-1-promotoren for at undgå nedlukning efter flere passager.

– Co-cistronisk ekspression af Emerald GFP (EmGFP), hvilket resulterer i korrelation af EmGFP-ekspression med knockdown fra din miR RNAi.

–Ekspression af mere end én konstrueret miR RNAi-sekvens på det samme transkript
, hvilket muliggør knockdown af flere gener samtidigt og
generering af syntetiske fænotyper. BLOCK-iT™ Inducerbart Pol II miR RNAi-ekspressionsvektorkit med EmGFP giver mulighed for at regulere RNAi-eksperimenter. Dette sæt indeholder pT-REx-DEST30 Gateway™ vektor, som efter simple klonings- og shuttling-teknikker producerer en miR RNAi-ekspressionsvektor, der er egnet til inducerbar knockdown. pT-REx-DEST30 Gateway™ vektoren indeholder CMV-promotoren med to kopier af tetracyclinoperatoren (tetO2)-sekvensen, der tillader højt niveau og reguleret ekspression. Dette tillader studiet af tab af funktion i en stabilt transficeret cellelinje, selvom genet af interesse er essentielt. Også induktion af miR RNAi-ekspression kan standses, så fænotypiske ændringer kan måles under gendannelse af genfunktion.

For en række ekspressionsmuligheder kan miR RNAi-kassetten, som indeholder EmGFP (kun pcDNA ™6.2-GW/EmGFP-miR-vektor), miR-flankerende regioner og en miRNA, der er homolog med målet af interesse, let flyttes ind i en række DEST-vektorer. Dette sker igennem Gateway™ rekombinationsreaktioner, hvor miR RNAi-kassetten overføres til en pDONR™ vektor (BP-reaktion) og derefter ind i en DEST-vektor (LR-reaktion) efter eget valg. De HiPerform™ systemet har det nye pLenti6.4/R4R2/V5-DEST vektor for høje virustitere og EmGFP-ekspression.