Invitrogen™ BACE1 (β -Secretase) FRET Assay Kit, rød

BACE1 (β -sekretase) er et nøgleenzym, der er involveret i produktionen af amyloid beta-peptider (Abeta), der findes i ekstracellulære amyloid plaques af Alzheimers sygdom (AD). I nogle tilfælde kan tidligt indsættende familiær AD tilskrives en svensk mutation i amyloid-precursorproteinet (APP), hvilket dramatisk forbedrer spaltningen af dette protein med BACE1. Dette og andre genetiske og patologiske beviser har ført til terapeutiske tilgange med fokus på inhibering af BACE1 og andre APP-spaltende enzymer, såsom gamma-sekretase. BACE1 fluorescensresonansenergioverførsel (FRET) Assay Kit giver en følsom og effektiv metode til screening af potentielle BACE1-hæmmere. Dette kit bruger renset baculovirus-udtrykt BACE1 og et nyt rødt FRET-peptidsubstrat baseret på den svenske mutant.

BACE1 FRET Assay Kit tilbyder:

Rød emission for at reducere sammensat interferens

Excitation ved 545 nm og aflæst emission ved 585 nm

En letanvendelig, hurtig, homogen analyse, der udføres i opløsning

Alsidig formatering til screening med høj kapacitet

Stabile —resultatmålinger kan foretages i op til 24 timer

. Princippet for BACE1 FRET-analysen er som følger: Peptidsubstratet syntetiseres med to fluoroforer, en fluorescerende donor (et rhodamin (Rh)-derivat) og en proprietær quenching-acceptor. Afstanden mellem disse to grupper er blevet valgt således, at donor (D) fluorescensenergi ved lysexcitation dæmpes signifikant af acceptoren (A) gennem et kvantemekanisk fænomen kendt som resonansenergioverførsel (figur 1). Efter spaltning af proteasen adskilles fluoroforen fra quenching-gruppen, hvilket genopretter donorens fulde fluorescensudbytte. Et svagt fluorescerende peptidsubstrat bliver således stærkt fluorescerende ved enzymatisk spaltning; stigningen i fluorescens er lineært relateret til proteolysehastigheden.

Kilde til BACE1 enzym:
En cDNA-sekvens, der koder for aminosyrerne 1-460 af human BACE1, svarende til ektodomænet, blev udtrykt i rekombinante, baculovirus-inficerede insektceller. Oprenset BACE1 eksisterer som proBACE1-formen med en tilsyneladende molekylvægt på 55 kDa og en N-terminal sekvens af TQHGIRLPLR.