Invitrogen™ Enkelt Cell-to-CT™ qRT-PCR-sæt

De Ambion Single Cell-to-C _T™ Kit indeholder en komplet valideret arbejdsgang til genekspressionsanalyse for prøver, der indeholder 1 10 –celler. Hvert kit indeholder reagenser til prøveforberedelse, revers transkription, præ-amplifikation og qPCR, der er blevet optimeret sammen i en enkel arbejdsgang, der kan gennemføres i kun fem trin.

Præ-optimeret protokol sikrer succes og sparer tid

Hver arbejdsgang begynder med en simpel 7-minutters prøveforberedelse, hvor celler lyseres effektivt og reproducerbart med minimal bearbejdning til en opløsning, der er kompatibel med nedstrøms RT-PCR, uden behov for oprensning. Dette efterfølges af brugen af Superscript™ RT for omvendt transskription, den TaqMan™ PreAmp Master Mix for at amplificere cDNA'et, og TaqMan Gene Expression Master Mix til qPCR. Alle disse fire trin er udviklet til at give maksimal følsomhed. Hele celleprøven holdes i den samme brønd under hele proceduren, så der ikke er prøvetab eller fortynding af det dyrebare begrænsede materiale, der kan påvirke følsomheden.

Enkeltcellefølsomhed

Følsomheden af real-time PCR-resultater kan påvirkes af effektiviteten af prøveforberedelse, revers transkription eller amplifikation. Single Cell-to-C _T- kittet har adresseret hvert af disse potentielle problemområder for at skabe en løsning, der muliggør pålidelig og robust genekspressionsanalyse fra enkeltceller med maksimal følsomhed. Påvisning af enkeltcelleækvivalenter ved hjælp af Single Cell-to-C _T- kittet viser passende linearitet og følsomhed af qPCR-resultater sammenlignet med en 100-celle prøvekontrol med fremragende teknisk reproducerbarhed. Som forventet udviser individuelle enkeltceller større variabilitet på grund af iboende biologisk heterogenitet. Derudover, gennem inklusion af et cDNA præ-amplifikationstrin, amplificeres mål af interesse nøjagtigt før real-time PCR. Dette kritiske trin øger signalet på en objektiv måde, hvilket udvider analysepotentialet for begrænsede prøver. Nøjagtigheden og signalforstærkningen af et 96-gen panel ved hjælp af præ-amplifikation er vist.

Overlegen ydeevne og reproducerbarhed sammenlignet med alternative metoder

Traditionelle prøveforberedelsesmetoder ved hjælp af organiske opløsningsmidler, glasfiberfiltre eller magnetiske perler er ikke egnede til enkeltcelleanalyse på grund af tab af prøve gennem ufuldstændig RNA-udfældning, binding og eluering. Derudover mangler de fleste enkeltcellede hjemmebrygningsmetoder, som involverer simpel kogning for at lysere celler, evnen til at inaktivere endogene RNaser for at stabilisere genekspressionsprofiler og kan resultere i kemisk spaltning af RNA og inhibitoroverførsel, inklusive gDNA-kontamination, som kan påvirke alle qRT-PCR-applikationer. I modsætning hertil viser Single Cell-to-C _T Kit overlegen følsomhed og reproducerbarhed til enkeltcelleanalyse sammenlignet med traditionelle oprensnings- eller hjemmebryggede kogemetoder.

• Præ-optimeret arbejdsgang til RT-PCR i realtid fra enkeltceller
• Maksimal følsomhed for enkeltcelleanalyse
• Overlegen ydeevne og reproducerbarhed sammenlignet med alternative metoder
• Komplet sæt bekvemmelighed og nem at følge protokol
• Velegnet til brug med 1-trins og 2-trins qRT-PCR
• Mindre farligt, mindre affald, færre ressourcer brugt