Invitrogen™ Ambion™ RNase-hæmmer, klonet, 40 U/μ L

Ambion RNase-inhibitor, et rekombinant humant protein produceret i E. coli , er en potent inhibitor af neutrale pancreas-RNase A-type enzymer. Hæmningsmåden er ikke-konkurrerende; inhibitoren binder RNaser tæt i et forhold på 1:1. Enzymet har vist sig at inaktivere RNaser, der findes i mange væv og celletyper. Tilsætning af ribonukleasehæmmeren (RI) har vist sig at være nyttig, når integriteten af RNA skal opretholdes, såsom ved fremstilling af cDNA ved revers transkription, in vitro RNA-transkription og ved in vitro proteinsyntese. RI hæmmer ikke RNase I, T1, T2, H, U1, U2 eller CL3. RI kræver et minimum på 1 mM DTT for at opretholde aktiviteten og har et aktivitetsområde mellem pH 5,0 til 8,0 med maksimal aktivitet mellem pH 7,0 og 8,0. Da inhiberingsmåden er dannelsen af et 1:1 kompleks med RNaser, skal man sørge for at undgå denaturering eller oxidation af ribonukleasehæmmeren (f.eks. ved tilsætning af SDS, urinstof osv.). RI bør tilføjes til transkriptions-, translations- og cDNA-syntesereaktioner for at give en slutkoncentration på 1U/μ L. RNase-hæmmer er grundigt testet for kontaminering af RNase-, exonuklease-, endonuklease- og proteaseaktivitet.
Enhedsdefinition: En enhed er mængden af protein, der kræves for at hæmme aktiviteten af 5ng RNase A med 50%. Enhedsanalysebetingelser: 100 mM Tris-acetat (pH 6,5), 1 mM EDTA, 1 mM cyklisk 2 ft., 3 ft.-CMP og RNase-inhibitor. Tilsætning af RNase A starter reaktionen. RNase-hæmmeraktivitet måles ved inhibering af hydrolyse af cyklisk 2 ft., 3 ft.-CMP med RNase A.

Applikationer:

Genekspressionsanalyse og genotypning, in vitro-transkription, PCR og realtids-PCR, realtids-PCR (qPCR), omvendt transkription