Få mere at vide
Invitrogen™ RecoverAll™ Total Nuclein Acid Isolation Kit til FFPE
Beskrivelse
Indeholder
16mL fordøjelsesbuffer; 60 ml Vask 1 koncentrat; 60mL Vask 2/3 koncentrat; 80 Opsamlingsrør; 40 filterpatroner; 19,2 ml isolationsadditiv; 5 ml elueringsopløsning; 160 μL protease; 240 μL 10X DNase-buffer; 160 μL DNase; 400 μL RNase A
De RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit til FFPE er til ekstraktion af total nukleinsyre fra formalin- eller paraformalinfikserede, paraffinindlejrede (FFPE) væv. Tilstrækkelige reagenser er inkluderet til 40 oprensninger fra op til fire 20μ m sektioner eller op til 35 mg usnittede kerneprøver hver. Funktioner af RecoverAll™ Total nukleinsyreisoleringssæt til FFPE:
• Optimeret til isolering af totale nukleinsyrer, inklusive mikroRNA'er, fra FFPE-væv
• Ingen proteinase K-fordøjelse natten —over påkrævet afparaffinér om morgenen og udfør qRT-PCR om eftermiddagen
• Typiske udbytter er> 50 % af dem af ufikseret væv
• Genvundne nukleinsyrer er velegnede til næste generations sekventering, real-time RT-PCR, PCR, mutationsscreening og mikroarray-
analyser Ekstraktion af nukleinsyrer fra vanskelige prøver Arkiverede
vævsprøver indeholder værdifuld information om sygdomstilstande, men det har traditionelt været vanskeligt at isolere nukleinsyrer fra dem af en kvalitet, der er egnet til molekylær analyse. Standard konserveringsteknikker bruger formalin, der vedligeholder vævsstruktur og forhindrer forrådnelse, men som også fanger nukleinsyrer og modificerer dem gennem protein-protein- og protein-nukleinsyre-tværbindinger. RNA (og til en vis grad DNA) er ofte så fragmenteret og kemisk modificeret, at det er uforeneligt med mange molekylære analyseteknikker. RNA-fragmentering i FFPE-væv kan ikke vendes; dog er proteasefordøjelsesbetingelserne for RecoverAll™ kit er designet til at frigive en maksimal mængde (se figur) af fangede RNA-fragmenter af alle størrelser, inklusive mikroRNA, på relativt kort tid.
De RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit-opløsning
Den RecoverAll™ Proceduren for total nukleinsyreisoleringskit kræver ca. 45 minutters praktisk tid og kan gennemføres på typisk mindre end 1 dag for RNA. FFPE-prøver afparaffineres ved hjælp af en række xylen- og ethanolvaske. Dernæst udsættes de for en omfattende proteasefordøjelse med en inkubationstid, der er skræddersyet til genvinding af enten RNA eller DNA. Nukleinsyrer oprenses derefter ved hjælp af en hurtig glasfiltermetode og elueres i enten vand eller puffer med lavt saltindhold.
Nukleinsyrer til næsten enhver nedstrøms anvendelse
Som det er tilfældet med alt FFPE-væv, forårsager prøvefiksering og opbevaring typisk nukleinsyrefragmentering og modifikation. Derfor kan downstream-applikationer, såsom mikroarray-analyse, som kræver mere uberørt RNA end qRT-PCR, kræve modifikation for optimale resultater. Selvom DNA har en tendens til ikke at fragmentere så let som RNA, ser det ud til at være mere reaktivt over for formalinen og kræver en længere (2-dages) proteasefordøjelsestid for at frigive væsentlige mængder DNA.
Ikke high-throughput kompatibel (manuel)
Tekniske data
Tekniske data
| Indhold og opbevaring | Boks 1 |
| Isoleringsteknologi | Spin kolonne (glasfiberfilter) |
| Oprensningstid | 45 min. (Hands-on) |
| Elueringsvolumen | 60μ L |
| Prøvetype | FFPE væv, Paraffin-indlejret (FFPE) væv |
| Endelig produkttype | Total RNA og DNA |
| High-throughput kompatibilitet | Ikke kompatibel med højt gennemløb (manuel) |
| Til brug med (applikation) | RT-PCR, qPCR, cDNA bibliotek konstruktion, NGS , mikroarray-analyse, blot hybridisering, Northern/Southern blotting, in vitro translation, nukleasebeskyttelsesassays, nukleinsyremærkning, hybridisering |
| Mængde | 40 forberedelser |
| Forsendelsestilstand | Boks 1: Stuetemperatur Boks 2: Tøris |
| Vis mere |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.