Invitrogen™ PARIS™ Kit

De Invitrogen™ PARIS™ systemet er til isolering af både RNA og naturligt protein fra den samme eksperimentelle prøve. Sættet tillader også adskillelse af nukleare og cytoplasmatiske fraktioner før RNA- og/eller proteinisolering. Sættet indeholder tilstrækkelige reagenser til 50 oprensninger fra 1 til 75 mg væv eller 100 til ¹⁰⁷ celler hver.

• Hurtig, enkel procedure
• Isoler nuklear og cytoplasmatisk RNA og protein fra dyrkede celler
• Isoler totalt RNA og protein fra dyrkede celler eller væv
• Ingen phenolekstraktion eller alkoholudfældning
• Reducerer tid, omkostninger og variabilitet mellem uafhængige eksperimentelle prøver.

Isolering af RNA af høj kvalitet er det første trin for en række genekspressionsanalyser. Meget ofte kræves der også supplerende undersøgelser på proteinniveau. Normalt udføres disse analyser under anvendelse af forskellige alikvoter af den samme eksperimentelle prøve. Men når man arbejder med sjældne, svært tilgængelige eller meget små prøver, er det nogle gange upraktisk at isolere RNA og native proteiner uafhængigt. I undersøgelser, der involverer et stort antal prøver, dyre reagenser eller iboende variabilitet (f.eks. celletransfektion), er tilføjelsen af uafhængige eksperimentelle prøver ikke kun dyr og tidskrævende, men kan også føre til inkonsistente resultater. For at løse disse problemer, protein- og RNA-isoleringssystemet (PARIS™ system) er blevet udviklet. Det giver mulighed for isolering af både RNA og protein fra den samme eksperimentelle prøve (se figur). Ved hjælp af PARIS™ system, RNA og protein kan isoleres samtidigt fra helcellelysater. Alternativt kan RNA og protein isoleres fra separate nukleare og cytoplasmatiske fraktioner. Væv eller dyrkede celler homogeniseres først i iskold Cell Disruption Buffer for at fremstille et totalt cellelysat. Da homogeniseringen udføres hurtigt på is og i nærværelse af detergent, kan både protein og RNA oprenses direkte fra dette lysat. Til RNA-isolering blandes en del af det totale cellelysat straks med et lige så stort volumen Lysis/Binding Solution. Total RNA oprenses derefter fra blandingen under anvendelse af et RNA-bindende glasfiberfilter. Efter tre hurtige vasketrin elueres RNA af høj kvalitet i en koncentreret form. Hele proceduren kan gennemføres på mindre end 20 minutter. Bemærk: Dette sæt anbefales ikke til væv med høje niveauer af ribonukleaser, såsom bugspytkirtlen.

Kompatibel med de fleste downstream-applikationer
RNA isoleret fra totale, nukleare eller cytoplasmatiske fraktioner med PARIS™ proceduren kan anvendes i en række downstream-applikationer, herunder blot-hybridisering, in vitro -translation, cDNA-syntese og RT-PCR. En DNase I-behandling anbefales til RNA, der vil blive brugt til RT-PCR-eksperimenter (se tilbehørsprodukter). Proteinfraktioner kan anvendes direkte til de fleste almindelige anvendelser, herunder funktionelle analyser, immunpræcipitation, western blotting eller todimensionel gelelektroforese (se figurerne).

Tilbehørsprodukter:
TURBO™ DNA- fri™ eller DNA- fri™ DNase-behandling og -fjernelsesreagenser (kat.nr. AM1907 og AM1906, henholdsvis) er ideelle til hurtigt at fjerne spormængder af DNA fra de samlede og nukleare RNA-prøver uden phenolekstraktion eller alkoholudfældning. Den cytoplasmatiske RNA-fraktion er praktisk talt fri for DNA-kontamination.