Få mere at vide
Invitrogen™ FirstChoice™ RLM-RACE sæt
Beskrivelse
Indeholder
Exo– Klenow, 10X Decamer Solution, 5X Reaction Buffer minus dATP, 5X Reaction Buffer minus dCTP, DECAtemplate GAPDH-M, and 0.5M EDTA should be stored at –20°C. Nuclease-free water may be stored at any temperature.
Kræver
SuperTaq TermostabilTaq DNA-polymerase sælges separat. For optimal amplifikation af fragmenter≥ 1 kb, brug SuperTaq-Plus.
FastAP™ Termosensitiv alkalisk fosfatase, 10X FastAP buffer, tobakssyrepyrophosphatase, 10x TAP-buffer, T4 RNA-ligase, 10X T4 RNA-ligasebuffer, M-MLV omvendt Transcriptase, RNasehæmmer, 10X RT-buffer, 2,5 mM dNTP-blanding, musethymus-RNA (1 mg/ml), tilfældige decamers, 5' RACE-adapter, 3' RACE-adapter, 5' RACE ydre primer, 5' RACE indre primer, 3' RACE ydre primer, 3' RACE Inner Primer, 5' RACE Outer Control Primer, 5' RACE Inner Control Primer, 5' PCR Control Primer, 3' RACE Control Primer og Ammonium Acetat Stop Solution bør opbevares ved -20 °C. Nukleasefrit vand kan opbevares ved enhver temperatur.
FirstChoice™ RLM-RACE Kittet er designet til at amplificere cDNA fra fuldlængde, capped mRNA gennem RNA Ligase Mediated Rapid Amplification of cDNA Ends (RLM-RACE). Sættet sikrer amplifikation af kun fuldlængdetranskripter ved at eliminere ribosomalt RNA, fragmenteret mRNA, tRNA og kontaminerende genomisk DNA under amplifikationsprocessen. Dette sæt er en væsentlig forbedring i forhold til den grundlæggende hurtige amplifikation af cDNA-ender (RACE) protokol.
Bemærk: Kalv-intestinal fosfatase (CIP) var blevet erstattet med FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase adjusted protocol, hvilket eliminerer behovet for at bruge phenol/kloroform-ekstraktion og ethanoludfældning. Hvis det vælges, kan phenol/chloroform-trinnet bruges med opdateret kit efter verificering af reaktionsvolumener.
Funktioner i RLM-RACE Kittet FirstChoice inkluderer:
- Udvælger 5' og/eller 3' ender af fuldlængde, capped mRNA
- Optimeret til at sikre detektion af selv sjældne mRNA, hvilket giver specifikt produkt
- Gør det muligt at færdiggøre eksperimentet på under en dag
Udvælger fuldlængde mRNA—uden rRNA, tRNA eller nedbrudt mRNA
I RLM-RACE-proceduren udvælges FirstChoice fuldlængde mRNA'er ved at behandle total- eller poly(A)-RNA med FastAP termosensitiv alkalisk fosfatase for at fjerne 5'-fosfatet fra alle molekyler, der indeholder frie 5'-fosfater (ribosomalt RNA, fragmenteret mRNA, tRNA og forurenende genomisk DNA). Fuldlængde mRNA'er er upåvirkede. RNA'et behandles derefter med tobakssyrepyrofosfatase (TAP) for at fjerne kapselstrukturen fra det fuldlængde mRNA, hvilket efterlader et 5'-monofosfat. En syntetisk RNA-adapter er ligeret til RNA-populationen—, kun molekyler med et 5'-fosfat, de ubelagte, fuldlængde mRNA'er, vil acceptere adapteren. Tilfældigt primede, reverse transkriptionsreaktioner og indlejret PCR udføres derefter for at forstærke 5'-enden af dit specifikke transkript.
Fra RNA til PCR på under en dag
Hvert trin i FirstChoice RLM-RACE-proceduren er optimeret, så du kan gennemføre alle enzymatiske reaktioner og endda starte PCR på højst 5 timer. FirstChoice RLM-RACE Kittet indeholder reagenser og enzymer til at producere 6 RLM-RACE-klare cDNA-præparater, primere og indlejrede RACE-adapterprimere til 100 PCR-reaktioner. Sættet inkluderer omvendt transkriptionsreagenser og 3' RACE-adapter og primere til 3' RACE. Hvert sæt indeholder kontrol-RNA og primere til at teste sættets ydeevne, protokollen beskrevet i brugervejledningen ved Platinum™ brug af II Hot-Start PCR Master Mix.
Ordreinfo
Forsendelsestilstand: Tøris
Tekniske data
Tekniske data
| Produkttype | RLM-RACE sæt |
| Inkluderer | Sæt med manuel, FastAP™ termosensitiv alkalisk fosfatase, 10X FastAP buffer, tobakssyrepyrofosfatase, 10x TAP-buffer, T4 RNA-ligase, 10X T4 RNA-ligasebuffer, M-MLV revers, Transcriptase RNasehæmmer, 10X RT-buffer, 2,5 mM dNTP-blanding, musethymus-RNA (1 mg/ml), tilfældige decamers, 5' RACE-adapter, 3' RACE-adapter, 5' RACE ydre primer, 5' RACE indre primer, 3' RACE ydre primer, 3' RACE ydre primer, 3' RACE Indre Primer, 5' RACE Outer Control Primer, 5' RACE Inner Control Primer, 5' PCR Control Primer, 3' RACE Control Primer og Ammoniumacetat Stop Solution, Nuklease-frit vand |
| Indhold og opbevaring | •FastAP™ Termosensitiv alkalisk fosfatase |
| Endelig produkttype | cDNA |
| Optimal reaktionstemperatur | 42 °C |
| Omvendt transkriptase | M-MLV |
| Format | Sæt |
| Produktlinje | Ambion, FirstChoice |
| Til brug med (applikation) | cDNA-biblioteker & Bibliotekskonstruktion |
| Mængde | 1 Sæt med manual |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Ved at klikke på Send, anerkender du, at du kan blive kontaktet af Fisher Scientific med hensyn til den feedback, du har givet i denne formular. Vi deler ikke dine oplysninger til andre formål. Alle angivne kontaktoplysninger skal også vedligeholdes i overensstemmelse med vores Privatlivspolitik.