Invitrogen™ Hurtig SYBR™ Green Cells-to-C _T™ Kit

Ambion Hurtigt SYBRGreen Cells-to-C _T™ Kit er en hurtig, nem og robust metode til at gå direkte fra dyrkede celler til realtids PCR-resultater. En banebrydende cellelyse- og RNA-stabiliseringsteknologi eliminerer den besværlige og tidskrævende RNA-oprensningsproces fuldstændigt. Sættet indeholder tilstrækkelige reagenser til 100 reaktioner. Fast SYBRGreen Cells-to-C _T Kit indeholder AmpliTaq™ Hurtig DNA-polymerase, UP, som tillader øjeblikkelig varmstart, og dermed minimerer uspecifik produktdannelse med hurtig real-time PCR.

• Inkluderer optimerede reagenser til at arbejde effektivt lige ud af æsken
• Enkel, effektiv Cells-to-C _T -teknologi muliggør prøveforberedelse ved stuetemperatur på kun 7 minutter, inklusive DNase-behandling
• Valideret nøjagtighed, enestående reproducerbarhed og maksimal følsomhed fra 10 til 100.000 celler pr. prøve; resultater svarende til dem fra oprenset RNA
• 2-trins QRT-PCR

Ekstraordinær værdi
Sættet inkluderer reagenser til prøveforberedelse integreret i et komplet, optimeret genekspressionsworkflow, herunder revers transkriptionsreagenser og en højtydende PCR-mastermix med SYBRGreen.

Ekstraordinær lethed
Protokollen begynder med en simpel 7-minutters prøveforberedelsesprocedure. Først vaskes celler i PBS og lyseres derefter i 5 minutter ved stuetemperatur; Dnase-behandling kan udføres sideløbende. Lysereaktionen standses, og prøven er derefter klar til revers transkription eller opbevaring ved -20 C °i op til 5 måneder. Fordi prøver behandles direkte i kulturplader (96- eller 384-brønde), minimeres prøvehåndtering og potentialet for prøvetab eller overførselsfejl, hvilket resulterer i højere reproducerbarhed. Efter prøveforberedelse tilsættes en del af cellelysatet til en RT-reaktion efterfulgt af real-time PCR ved hjælp af den medfølgende mastermix.

Ekstraordinær præstation
For at demonstrere kittets ydeevne blev replikateksperimenter kørt ved hjælp af enten traditionel RNA-oprensning og real-time PCR-analyse eller Fast SYBRGreen Cells-to-C _T Kit. Sættet viser ydeevne svarende til resultater opnået ved anvendelse af oprenset RNA til analyse af 10 til 100.000 celler. Derudover blev følsomheden, effektiviteten og det dynamiske område vist at være overlegen i forhold til konkurrerende lysatsæt. Prøver forberedt med sættet er blevet testet for kompatibilitet på forskellige real-time PCR-platforme, inklusive dem fra Applied Biosystems , Roche , og Bio-Rad .

Tilbehørsprodukt:
SYBRGreen Cells-to-C _T kontrolsættet (kat. nr. 4402959) indeholder en Xeno™ RNA-kontrol og primersæt og anbefales til at overvåge effektiviteten af cellelyse og amplifikationsinhibering i celler-til- _CT- reaktioner.