Invitrogen™ Dynabeads™ Oligo(dT) ₂₅

Dynabeads™ Oligo(dT) ₂₅ mRNA-isoleringskugler er specifikt målrettet mod og indfanger mRNA-molekyler fra praktisk talt enhver rå prøve og eliminerer behovet for at oprense totalt RNA, når den ønskede informationsbærende nukleinsyre er mRNA. Da mRNA kun omfatter ca. –15% af total cellulært RNA, er isolering af totalt RNA ikke den mest effektive måde at isolere mRNA på. Andre teknologier designet til at rense det samlede RNA-udbytte∼ 80 % ribosomalt RNA og tvinger mRNA til at konkurrere med ribosomalt RNA, overføre RNA, mikro-RNA, lille nukleolært RNA og lille cytoplasmatisk RNA om membranbinding. Fordele ved Dynabeads™ Oligo(dT) ₂₅ perler:

• Hurtig og skånsom procedure giver rent intakt mRNA
• Ekstremt ren mRNA-isolering, bedste valg opstrøms for cDNA-syntese
• Udsøgt følsom mRNA-isolering muliggør cDNA-syntese og cDNA-bibliotekskonstruktion fra ultrasmå startprøver (muliggør cDNA-bibliotekskonstruktion fra en enkelt celle)

Sådan fungerer perlerne
Oligo(dT) ₂₅ -coated Dynabeads™ specifikt målrette og fange mRNA-transkriptomet fra en ekstrem bred vifte af rå startprøver. Ribosomalt RNA, DNA, proteiner og små RNA-molekyler (såsom transfer-RNA, mikro-RNA og lille nukleolært RNA) binder sig ikke til perlerne og kasseres. Kun polyadenylerede RNA-arter (mRNA) fanges. Isoleret mRNA er rent, hvilket eliminerer behovet for ribosomal RNA-subtraktion eller en post-ekstraktions-DNase-behandling. Dette søjlefrie system sikrer den højeste transkriptomgendannelse:

• Fysisk mRNA-indfangning på mobile magnetiske perler
• Hurtige og skånsomme magnetiske håndteringsprocedurer
• Intet mRNA tabt under høj g-kraft spins
• Intet mRNA fanget i søjlemembraner under

eluering Anvendelser
mRNA er velegnet til alle nedstrøms molekylære applikationer, herunder genkloning, cDNA-syntese, cDNA-bibliotekskonstruktion, RT-PCR, kvantitativ RT-PCR, RPA (Ribonuclease Protection Assay), subtraktiv hybridisering, primerforlængelse, SAGE , RACE og andre. De Dynabeads™ Oligo(dT) ₂₅ mRNA-isoleringskugler er den ideelle mRNA-oprensningsmetode før cDNA-bibliotekskonstruktion. Brug af disse perler sikrer den højeste genopretning og berigelse af transkriptomet. Disse perler fanger mere af transkriptomet, end det er muligt med metoder, der integrerer et totalt RNA-isoleringstrin opstrøms for mRNA-isolering.

Alsidige elueringsmuligheder
Eluering kan udføres i enhver volumen ned til 5μ L. mRNA-eluering er valgfri, fordi enzymatiske reaktioner i nedstrømsprocedurer ikke hæmmes af tilstedeværelse af Dynabeads™ . Derudover kan man udføre cDNA-syntese direkte på perlerne for at skabe et genanvendeligt fastfase-cDNA-bibliotek.