Få mere at vide
Invitrogen™ Cells-to-cDNA™ II sæt
Beskrivelse
De Ambion™ Cells-to-cDNA™ II Kit (patentanmeldt) producerer cDNA fra dyrkede pattedyrceller på mindre end 2 timer. Ingen RNA-isolering er påkrævet. Dette kit indeholder tilstrækkelige reagenser til 100 reaktioner og er ideelt til dem, der ønsker at udføre reverse transkriptionsreaktioner på et lille antal celler, adskillige celleprøver eller for forskere, der ikke er bekendt med RNA-isolering.
• Ingen RNA-rensning påkrævet
• Fra celler i kultur til cDNA på mindre end 2 timer
• Registrer sjældne beskeder på så få som 1 celle
• Ideel til laboratorier, der ikke er udstyret
til RNA-isolering Ideel til RT-PCR-applikationer
Cells-to-cDNA™ II Kit (patentanmeldt) integrerer RNase-inaktivering og DNase I-behandling i en RT-PCR-kompatibel cellelysebuffer, hvilket helt eliminerer RNA-isolering. De fleste cellelysebuffere indeholder stærke denatureringsmidler, der, hvis de overføres til enzymatiske reaktioner, vil hæmme eller inaktivere de fleste enzymer. Hvis der anvendes en lysisbuffer uden stærke denatureringsmidler, kan endogen RNase hurtigt nedbryde cellulært RNA. De Cells-to-cDNA™ II Kit indeholder en ny cellelysisbuffer, der inaktiverer endogene RNaser uden at kompromittere nedstrøms enzymatiske reaktioner. Efter inaktivering af RNaser kan cellelysatet tilsættes direkte til en cDNA-syntesereaktion. Cells-to-cDNA™ II er kompatibel med både et-trins og to-trins RT-PCR-protokoller.
Kvantitative —lineære resultater og ingen påviselig DNA-kontamination
For at illustrere den kvantitative, lineære respons af Cells-to-cDNA™ II til variationer i inputcelleantal blev der udført et kvantitativt RT-PCR-eksperiment i realtid ved hjælp af ABI 7700 sekvensdetektionssystem. Plotningscyklustærskel (Ct) versus cellekoncentration for GAPDH gav en standardkurve med en korrelation på 0,99. Således, Cells-to-cDNA™ II giver lineære resultater for 1 til 10.000 celler/μ L i en real-time RT-PCR to-trins assay. Det skal også bemærkes, at minus-template PCR-kontrollen for GAPDH-eksperimentet var negativ, hvilket indikerer fuldstændig fjernelse af genomisk DNA.
Enkel procedure Sættet
leveres med alt hvad du behøver for at gå fra dyrkede celler til PCR-klar cDNA på mindre end 2 timer; ingen RNA-isolering er påkrævet. Celler vaskes først med PBS og resuspenderes derefter i cellelysebufferen. En kort opvarmning lyserer samtidig cellerne og inaktiverer RNaser. En valgfri DNase-fordøjelse udføres derefter for at nedbryde genomisk DNA, efterfulgt af et varmeinaktiveringstrin. En fraktion af cellelysatet anvendes derefter i en omvendt transkriptionsreaktion med de inkluderede reagenser.
Tilbehørsprodukter:
SuperTaq™ Termostabil Taq DNA-polymerase anbefales og fås separat (kat. nr. AM2050 og AM2052). For optimal amplifikation af fragmenter større end 1 kb, brug SuperTaq™ Plus termostabil Taq DNA-polymerase (kat. nr. AM2054 og AM2056).
Ordreinfo
Forsendelsestilstand: Tøris
Tekniske data
Tekniske data
| Indhold og opbevaring | 1X PBS, Cell Lysis II Buffer,μ L DNase 1, 10X RT Buffer, M-mLV Reverse Transcriptase , RNase-hæmmer, dNTP-mix, tilfældige decamere, Oligo(dT) 18- primere, pansrede RNA™ Kontrol, pansret RNA™ Primer Pair og Endogent Primer Pair skal opbevares kl -20 °C. Nukleasefrit vand kan opbevares ved enhver temperatur. |
| Optimal reaktionstemperatur | 42 °C |
| Produktlinje | Ambion , Cells-to-cDNA |
| Oprensningstid | 2 hr. |
| Mængde | 40 reaktioner |
| Omvendt transkriptase | M-MLV |
| Forsendelsestilstand | Tøris |
| Til brug med (applikation) | Realtids-PCR (qPCR), RT-PCR |
| Endelig produkttype | cDNA |
| Antal reaktioner | 40 reaktioner |
| Vis mere |
Må kun bruges til undersøgelsesformål. Må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Dit input er vigtigt for os. Udfyld denne formular for at give feedback relateret til indholdet på dette produkt.