Invitrogen™ Stabiliseret Blood-to-C _T™ Nuclein Acid Preparation Kit til qPCR, kompatibel med enten PAXgene™ eller Tempus™ Blod RNA rør

Stabilized Blood-to-C _T™ Nucleic Acid Preparation Kit til qPCR gør det muligt at udføre ekspressionsanalyse direkte fra en 500μ L alikvot af humant fuldblod opsamlet i PAXgene™ eller Tempus™ Blod-RNA-rør uden konventionel RNA-rensning. Denne enkle procedure skaber et lysat, der kan gå direkte ind i revers transkription og real-time PCR med den følsomhed og specificitet, der svarer til konventionelt oprenset RNA. Dette sæt sparer tid, genererer meget mindre spild og tilbyder en enkel arbejdsgang, der er velegnet til nogle få prøver eller let kan integreres i automatiserede applikationer med høj gennemstrømning.

Enkel arbejdsgang uden at ofre følsomhed& Specificitet
Processen består af pelletering og vask af en μ500 L aliquot fra blodrøret, efterfulgt af et unikt fordøjelses-/DNase-trin, som bevarer RNA-integriteten. Fremstillingen foregår udelukkende ved stuetemperatur i modsætning til andre produkter, der kræver temperaturspecifikke inkubationstrin. Op til 96 prøver kan fremstilles på mindre end en time, hvilket er halvdelen af den tid, det tager for konkurrerende spinsøjleoprensning at behandle kun 12 prøver med mindre praktisk indsats. Det resulterende lysat kan gå direkte ind i et-trins eller to-trins QRT-PCR-reaktioner eller opbevares til senere brug (1 time ved 4 °C eller 5 måneder frosset). Denne enkle procedure finder sted i den samme prøvebehandlingsbrønd, fra start til slut, hvilket betyder, at der ikke overføres prøve. Revers transkriptionsreagenser til cDNA-syntese, TaqMan master mix, og TaqMan analyser til real-time PCR-analyse tilgængelige separat.

Det samlede antal mulige revers transkription og PCR-reaktioner fra én startprøve afhænger af minimumsprøvekravene for de ønskede RT-PCR-kits. Se venligst brugerdokumentationen for flere detaljer.

Skærm, opdag eller valider
For brugere med specifikke gener af interesse er Stabilized Blood-to-C _T Nucleic Acid Preparation Kit til qPCR designet til at muliggøre hurtig screening fra en lille mængde startprøve (ca. 5 % af det totale volumen af en korrekt fyldt PAXgene eller Tempus Blod-RNA-rør pr. prøve). Resten af blodrøret kan arkiveres til senere brug eller renses efter behov. De, der udfører opdagelses- eller valideringseksperimenter med RT-PCR-analyse i realtid, vil spare indsats, tid og samlede omkostninger med Stabilized Blood-to-C _T Nucleic Acid Preparation Kit til qPCR– samtidig med at de anvender en skalerbar proces, der gør det muligt for laboratorier, der er flaskehalsede af konventionel oprensning, endelig at begynde at behandle prøver med lethed.

miRNA analyse
Med det voksende fokus på ikke-kodende RNA og dets regulerende rolle i udvikling og sygdom, er det betryggende at vide, at disse små, men vigtige RNA-molekyler kan detekteres korrekt med Stabilized Blood-to-C _T Nucleic Acid Preparation Kit til qPCR. Forskere har testet lysatet med Applied Biosystems TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit og TaqMan Universal Master Mix II mod et stort panel af TaqMan microRNA-analyser og genererede resultater, der er lig med eller bedre end dem for den førende konkurrents miRNA-oprensningsprodukt.

Reduceret fodaftryk& Mindre spild for flere besparelser
Konkurrencedygtige produkter, især kolonnebaserede metoder, genererer betydelige mængder plastik og biofarligt affald pr. prøve (spinkolonner, spidser, mikrofugerør og reagenser). Stabilized Blood-to-C _T Nucleic Acid Preparation Kit til qPCR forenkler arbejdsgangen, så det samlede plastaffald er 75 % mindre efter vægt for et sammenligneligt antal prøver behandlet via kolonner. Sættet genererer intet organisk affald. Den har også et pladsbesparende fodaftryk for at maksimere fryserens kapacitet. Reduceret bortskaffelse af farligt affald og mindre plastforbrug medfører omkostningsbesparelser– samt at reducere miljøbelastningen.

• Detekter totalt RNA fra PAXgene (herunder miRNA) eller Tempus Blod RNA rør uden oprensning
• Hurtigt —Forbered 96 prøver til TaqMan-baseret real-time RT-PCR på under 1 time
• Robust —500μ l prøve behandlet ved stuetemperatur med resultater svarende til dem fra oprenset RNA
• Fleksibelt —format Prøver kan fremstilles i mikrofugerør eller manuelle/automatiserede 96-brønds plader
• Kompatibel med 1-Step , 2-trins qRT-PCR og automatiserede protokoller, high-throughput kompatible

Realtids-RT-PCR-dataene genereret fra lysatet svarer til resultater opnået fra konventionelt oprenset RNA fra de samme rør og er blevet valideret med følgende qPCR-reagenser:

• Applied Biosystems Høj kapacitet RNA-to-cDNA Kit og TaqMan Genekspression Master Mix
• Invitrogen SuperScript™ VILO™ cDNA Synthesis Kit og TaqMan Genekspression Master Mix
• Applied Biosystems TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit og TaqMan Universal Master Mix II
• Applied Biosystems TaqMan One-Step RT-PCR Master Mix Reagents Kit

For brugere, der har brug for fuld oprensning: Hvis konventionel RNA-rensning stadig er påkrævet for restblodrøret, er en mulighed MagMAX for stabiliserede blodrør RNA-isoleringskit. Dette produkt maksimerer dit udbytte af totalt RNA fra PAXgene (herunder miRNA) eller Tempus Blod RNA rør ved hjælp af bevist magnetisk perle-baseret separationsteknologi.