Invitrogen™ Alexa Fluor™ 647 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ 647 er en lys og fotostabil langbølget rød farve med excitation, der er ideelt egnet til 633 nm laserlinjen. Anvendes til stabil signalgenerering ved billeddannelse og flowcytometri, Alexa Fluor™ 647-farve er vandopløselig og pH-ufølsom fra pH 4 til pH 10. Fluorescens for denne langbølgede Alexa Fluor™ farve er ikke synligt for det menneskelige øje, men opfanges let af de fleste billeddannelsessystemer. Ud over reaktive farveformuleringer tilbyder vi Alexa Fluor™ 647-farve konjugeret til en række antistoffer, peptider, proteiner, sporstoffer og amplificeringssubstrater optimeret til cellulær mærkning og detektion.

NHS-esteren (eller succinimidylesteren) af Alexa Fluor™ 647 er det mest populære værktøj til at konjugere dette farvestof til et protein eller antistof. NHS-estere kan bruges til at mærke til de primære aminer (R-NH₂) for proteiner, aminmodificerede oligonukleotider og andre aminholdige molekyler. Det resulterende Alexa Fluor™-konjugat vil have lysere fluorescens og større fotostabilitet end konjugaterne af andre spektralt lignende fluoroforer.

Detaljerede oplysninger om denne AlexaFluor™ NHS-ester:

• Fluorofor-mærkat: Alexa Fluor™ 647-farve
• Reaktiv gruppe: Reaktivitet for
• NHS-ester: Primære aminer på proteiner og ligander, aminmodificerede oligonukleotider
• Ex/Em af konjugatet: 651/672 nm
• Ekstinktionskoefficient: 270,000 cm^-1M^-1
• Spektralt lignende farver: Cy5™
• Molekylvægt: ∼1250

Typisk konjugeringsreaktion
Du kan konjugere aminreaktive reagenser med stort set ethvert protein eller peptid (den medfølgende protokol er optimeret til IgG-antistoffer). Du kan skalere reaktionen for enhver mængde protein, men koncentrationen af proteinet bør være mindst 2 mg/ml for at opnå optimale resultater. Vi anbefaler at prøve tre forskellige grader af mærkning ved at bruge tre forskellige molære forhold mellem reaktiv reagens og protein.

Alexa Fluor™ NHS-ester opløses typisk i vandfrit dimethylformamid af høj kvalitet (DMF) eller dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345), og reaktionen udføres i 0,1–0,2 M natriumbicarbonatbuffer, pH 8,3, ved stuetemperatur i 1 time. Eftersom pKa af den terminale amin er lavere end for lysinepsilon-aminogruppen, kan du opnå mere selektiv mærkning af aminterminalen ved at bruge en buffer tættere på neutral pH.

Se brugervejledningen for instruktioner om opløselighed.

Konjugatoprensning
Mærkede antistoffer adskilles typisk fra fri Alexa Fluor™-farve ved hjælp af en gelfiltreringskolonne såsom Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller tilsvarende. For meget større eller mindre proteiner vælges et gelfiltreringsmedium med en passende molekylvægtsgrænse eller oprensning ved dialyse. Vi tilbyder flere oprensningssæt, der er optimeret til forskellige mængder antistofkonjugat:

• Antistofkonjugatoprensningssæt til 0,5-1 mg (kat.-nr. A33086)
• Antistofkonjugatoprensningssæt til 20-50 μg (kat.-nr. A33087)
• Antistofkonjugatoprensningssæt til 50-100 μg (kat.-nr. A33088)

Lær mere om protein- og antistofmærkning
Vi tilbyder et bredt udvalg af Molecular Probes™ antistof- og proteinmærkningssæt, der passer til dit udgangsmateriale og din eksperimentelle opsætning. Se vores antistofmærkningssæt eller brug vores værktøj til valg af mærkningskemi for andre valg. For at lære mere om vores mærkningssæt kan du læse afsnit 1.2 i Molecular Probes™ Handbook — Kits for Labeling Proteins and Nucleic Acids.

Vi laver et tilpasset konjugat til dig
Hvis du ikke kan finde det, du leder efter i vores onlinekatalog, vil vi forberede et tilpasset antistof- eller proteinkonjugat til dig. Vores tilpassede konjugationsservice er effektiv og fortrolig, og vi står ved kvaliteten af vores arbejde. Vi er ISO 13485:2000 certificeret.