Invitrogen™ Alexa Fluor™ 633 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ 633 er et lyst og fotostabilt langt rødt farvestof med excitation, der er ideelt egnet til 633 nm laserlinjen. Anvendes til stabil signalgenerering i billeddannelse og flowcytometri, Alexa Fluor™ 633 farvestof er vandopløseligt og pH-ufølsomt fra pH 4 til pH 10. Fluorescens af denne lange bølgelængde Alexa Fluor™ farvestof er ikke synligt for det menneskelige øje, men detekteres let af de fleste billeddannelsessystemer. Ud over reaktive farveformuleringer tilbyder vi Alexa Fluor™ 633 farvestof konjugeret til en række antistoffer, peptider, proteiner, sporstoffer og amplifikationssubstrater optimeret til cellulær mærkning og påvisning. NHS-esteren (eller succinimidylesteren) af Alexa Fluor™ 633 er det mest populære værktøj til at konjugere dette farvestof til et protein eller antistof. NHS-estere kan bruges til at mærke til de primære aminer (R-NH₂) for proteiner, aminmodificerede oligonukleotider og andre aminholdige molekyler. Det resulterende Alexa Fluor™ konjugat vil udvise lysere fluorescens og større fotostabilitet end konjugaterne af andre spektralt lignende fluoroforer.

Detaljeret information om dette AlexaFluor™ NHS ester:
Fluorofor etiket: Alexa Fluor™ 633 farvestof
Reaktiv gruppe: NHS
esterreaktivitet: Primære aminer på proteiner og ligander, aminmodificerede
oligonukleotider Ex/Em af konjugatet: 621/639
nm ekstinktionskoefficient: 159.000 cm ^-1 M ^-1
Spektralt lignende farvestoffer: Cy5™
Molekylvægt: ∼1200

Typisk konjugeringsreaktion
Du kan konjugere aminreaktive reagenser med praktisk talt ethvert protein eller peptid (den medfølgende protokol er optimeret til IgG-antistoffer). Du kan skalere reaktionen for enhver mængde protein, men koncentrationen af proteinet bør være mindst 2 mg/ml for at opnå optimale resultater. Vi anbefaler at prøve tre forskellige grader af mærkning ved at bruge tre forskellige molære forhold mellem det reaktive reagens og protein.

De Alexa Fluor™ NHS-ester opløses typisk i vandfrit dimethylformamid af høj kvalitet (DMF) eller dimethylsulfoxid (DMSO) (D12345), og reaktionen udføres i 0,–1 0,2 M natriumbicarbonatbuffer, pH 8,3, ved stuetemperatur i 1 time. Fordi pKa af den terminale amin er lavere end for lysinepsilon-aminogruppen, kan du opnå mere selektiv mærkning af aminterminalen ved at bruge en buffer tættere på neutral pH.

Konjugatoprensning Mærkede antistoffer
er typisk adskilt fra frie Alexa Fluor™ farve ved hjælp af en gelfiltreringskolonne, som f.eks Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 eller tilsvarende. For meget større eller mindre proteiner vælges et gelfiltreringsmedium med en passende molekylvægtsgrænse eller oprensning ved dialyse. Vi tilbyder flere oprensningssæt optimeret til forskellige mængder antistofkonjugat:
Antistofkonjugatoprensningskit til 0,5-1 mg (kat.nr. A33086)
Antistofkonjugatoprensningskit til 20-50μ g (Kat. Nr. A33087)
Antistofkonjugatoprensningskit til 50-100μ g (Kat. nr. A33088)

Lær mere om protein- og antistofmærkning Vi tilbyder
et bredt udvalg af Molecular Probes™ antistof- og proteinmærkningssæt, der passer til dit udgangsmateriale og din eksperimentelle opsætning. Se vores antistofmærkningssæt eller brug vores værktøj til valg af mærkningskemi for andre valg. For at lære mere om vores mærkningssæt, læs sæt til mærkning af proteiner —og nukleinsyrer afsnit 1.2 i Molecular Probes™ Håndbog.

Vi ’laver et tilpasset konjugat til dig
Hvis du ’ikke kan finde ’det, du leder efter i vores onlinekatalog, vil ’vi forberede et tilpasset antistof- eller proteinkonjugat til dig. Vores tilpassede konjugationsservice er effektiv og fortrolig, og vi står ved kvaliteten af vores arbejde. Det er vi ISO 13485:2000 certificeret.